HS-173

HS-173 mostra potenti effetti antiproliferativi nelle cellule T47D, SK-BR3 e MCF7 con IC50 di 0,6, 1,5 e 7,8 μM, rispettivamente. [1] Questo composto causa una soppressione completa della via PI3K nelle linee cellulari tumorali (Hep3B e SkBr3). Inoltre, induce l'apoptosi cellulare influenzando la distribuzione del ciclo cellulare e attivando le caspasi, e blocca l'angiogenesi indotta da VEGF in vitro. [2]

HS-173 diminuisce la formazione di vasi sanguigni nei topi. [2] Questo composto attenua notevolmente lo sviluppo della fibrosi epatica bloccando la segnalazione PI3K/Akt in vivo. [4]

• Saggio della PI3-Kinasi

  Il saggio PI3K viene eseguito utilizzando il kit Kinase-Glo Max per il saggio della chinasi luminescente che quantifica la quantità di ADP prodotta dalla reazione della PI3K. In breve, una PI3K attiva (100 ng) viene preincubata con questo composto per 5 minuti in tampone di reazione della chinasi (25 mM MOPS [pH 7.0], 5 mM MgCl₂ e 1 mM EGTA) e 10 μg di l-α-fosfatidilinositolo (PI). Prima dell'aggiunta di PI, viene sonicato con tampone di sonicazione (25 mM MOPS [pH 7.0], 1 mM EGTA) in acqua per 20 minuti per consentire la formazione di micelle. Quindi la reazione viene avviata con l'aggiunta di 10 μM di ATP e lasciata per 180 minuti. Per terminare la reazione della chinasi, viene aggiunto lo stesso volume di tampone Kinase-Glo Max. Dopo 10 minuti, le piastre vengono lette su un lettore di piastre GloMax per la rilevazione della luminescenza.

• Linee cellulari

  T47D, SK-BR3, MCF7 cells

• Concentrazioni

  ~50 μM

• Tempo di incubazione

  48 hours

• Metodo

  Cell viability is performed by a MTT assay. Briefly, T47D cells are plated in 96-well plates for 24 h. Then, the medium is removed and cells were treated with either DMSO as a control or various concentrations of inhibitors. The final concentration of DMSO in the medium was ≤0.1% (v/v). After the cells are incubated for 48 h, 20 μL MTT solution (5 mg/mL) is added to each well for another 4 h at 37 °C. The formazan crystals that formed are dissolved in DMSO (100 μL/well) by constant shaking for 5 min. The plate is then read on a microplate reader at 540 nm. Three replicate wells are used for each analysis. The median inhibitory concentration (IC50, defined as the drug concentration at which cell growth is inhibited by 50%) is assessed from the dose−response curves. To assess the effect of compounds on cell proliferation, T47D cells are cultured with this compound (0.1−100 μM) for 48 h before MTT analysis.

• Modelli animali

  Male BALB/c mice with CCl4-induced liver fibrosis

• Dosaggi

  ~20 mg/kg

• Somministrazione

  p.o.