Harmine hydrochloride

L'armine inibisce la fosforilazione del substrato da parte di DYRK1A più potentemente di quanto inibisca la fosforilazione del substrato da parte della chinasi strettamente correlata DYRK1B [concentrazioni inibitorie semi-massimali (IC50) di 33 nM contro 166 nM, rispettivamente] e da parte dei membri più distanti della famiglia, DYRK2 e DYRK4 (1,9 μM e 80 μM, rispettivamente). Concentrazioni molto più elevate di armina sono richieste per sopprimere l'autofosforilazione della tirosina dell'intermedio traduzionale di DYRK1A in un sistema di traduzione in vitro batterico (IC50 = 1,9 μM). L'armine inibisce la fosforilazione di un substrato specifico da parte di DYRK1A in cellule coltivate con una potenza simile a quella osservata in vitro (IC50 = 48 nM), senza effetti negativi sulla vitalità delle cellule. L'armine non inibisce l'autofosforilazione della tirosina di DYRK1A nelle cellule HEK293[1]. L'armine è in grado di indurre la proliferazione delle cellule beta, aumentare la massa delle isole e migliorare il controllo glicemico. È uno stimolante del SNC[2].

In un modello di pancreatectomia parziale (PPX), il trattamento con armina induce l'etichettatura Ki-67 nelle cellule beta sia nei topi sham-operati che nei topi sottoposti a PPX, con la proliferazione più robusta nelle cellule beta dei topi PPX trattati con armina. Nel modello PPX, la rigenerazione della massa delle cellule beta è sostanzialmente più rapida nei topi trattati con armina rispetto ai controlli, raggiungendo valori quasi normali in soli 14 giorni. In un modello murino euglicemico con immunodeficienza combinata grave (NOD-SCID) non obeso, l'etichettatura con BrdU e Ki-67 è da due a tre volte maggiore nelle cellule beta umane trapiantate nella capsula renale di topi trattati con armina rispetto ai topi euglicemici di controllo, senza evidenza di morte delle cellule beta. In un modello di trapianto di isole umane a massa marginale in topi NOD-SCID diabetici da streptozotocina, il trattamento con armina porta anche a un controllo glicemico quasi normale. L'armine induce la produzione degli importanti fattori di trascrizione delle cellule beta NKX6.1, PDX1 e MAFA.

• Linee cellulari

  HeLa and HEK293 cells

• Concentrazioni

  1 nM-100 μM

• Tempo di incubazione

  56 h

• Metodo

  The effects of inhibitors on cell proliferation and viability are determined using a tetrazolium salt-based assay (WST-1). HeLa or HEK293 cells are seeded at a density of 5000 cells per well on 96-well plates. After overnight culture, serial dilutions of harmine in culture medium are applied to the wells (as triplicate samples) and the cells are cultured for 56 h without changing the medium, before the WST-1 assay is performed.

• Modelli animali

  C57BL/6 mice

• Dosaggi

  10 mg/kg

• Somministrazione

  i.p.