GW9662

GW9662 si lega a Cys(285) su PPARgamma, che è conservato tra tutti e tre i PPAR. Questo composto agisce come antagonista di PPARgamma, il che è confermato in un saggio di inibizione della differenziazione degli adipociti. [1] Previene l'attivazione di PPARγ e inibisce la crescita delle linee cellulari di tumore mammario umano (MCF7, MDA-MB-468, MDA-MB-231) con IC50 di 20 μM-30 μM, suggerendo l'esistenza di proprietà agonistiche di PPARγ di questa sostanza chimica o meccanismi di inibizione della crescita indipendenti da PPARγ. Il co-trattamento con questo composto (10 μM) si traduce in un numero statisticamente inferiore di cellule vitali dopo 7 giorni nelle cellule MDA-MB-231. [2] I ligandi di PPARγ1 potrebbero sopprimere la formazione di osteoclasti indotta da RANKL nelle cellule mieloidi murine primarie (BMs) e RAW264.7. È importante sottolineare che la soppressione da parte di questi ligandi è invertita in modo dose-dipendente con questa sostanza chimica (2 μM). Essa (2 μM) blocca la soppressione della formazione di osteoclasti da parte di IL-4 nelle BMs. Questo composto (1 μM) blocca l'attivazione di NF-κB da parte di RANKL nelle cellule RAW264.7. [3] GW9662 (10 μM) inibisce l'adipogenesi indotta da ormoni e agonisti dei preadipociti primari di pazienti con malattia oculare tiroidea. [4]

Il pretrattamento con LPS (1 mg/kg i.p.) attenua significativamente tutti i marcatori di danno renale e disfunzione causati da lesione da ischemia/riperfusione (I/R) nei ratti. In particolare, questo composto (1 mg/kg i.p.) abolisce gli effetti protettivi di LPS. [5]

• Saggio di legame

  I domini di legame del ligando (LBD) umani di PPARα, PPARγ e PPARδ sono espressi in E. coli come proteine di fusione con tag di poliistidina. I recettori vengono immobilizzati su perle SPA mediante l'aggiunta del recettore desiderato (15 nM) a una sospensione di perle SPA modificate con streptavidina (0,5 mg/mL) in tampone di saggio. La miscela viene lasciata equilibrare per almeno 1 ora a temperatura ambiente e le perle vengono precipitate mediante centrifugazione a 1×10³ g. Il surnatante viene scartato e le perle vengono risospese nel volume originale di tampone di saggio fresco con miscelazione delicata. La procedura di centrifugazione/risospensione viene ripetuta e la sospensione risultante di perle rivestite di recettore viene utilizzata immediatamente o conservata a 4 ℃ per un massimo di 1 settimana prima dell'uso. [3H]GW2443 sono utilizzati come radioligandi per la determinazione del legame competitivo a PPARα, PPARγ e PPARδ, rispettivamente. Salvo diversa indicazione, il tampone utilizzato per tutti i saggi è 50 mM HEPES (pH 7), 50 mM NaCl, 5 mM CHAPS, 0,1 mg/mL BSA e 10 mM DTT. Per alcuni esperimenti, l'HEPES (pH 7) viene sostituito con 50 mM Tris (pH 8).

• Linee cellulari

  MDA-MB-231 cells

• Concentrazioni

  10 μM

• Tempo di incubazione

  10 days

• Metodo

  MDA-MB-231 cells are seeded at a density of 1 × 10⁵ cells per 25 cm³ tissue culture flask. After 24 h (day 0), the growth medium is replaced with fresh medium containing GW9662 (10 μM) or both together. Control flasks receives 0.1% DMSO. Cells are harvested on days 0, 3, 5, 7, 10 for each treatment condition by trypsinisation, stained using trypan blue, and the total and viable number of cells per flask calculates using a haemocytometer.

• Modelli animali

  male Wistar rats

• Dosaggi

  1 mg/kg

• Somministrazione

  intraperitoneal injection