GSK650394

N. catalogoS7209 Lotto:S720902

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Dati tecnici

Formula

C25H22N2O2
Peso molecolare 382.45 Numero CAS 890842-28-1
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 76 mg/mL (198.71 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione GSK650394 è un inibitore della chinasi-1 regolata dal siero e dai glucocorticoidi con IC50 di 62 nM e 103 nM rispettivamente per SGK1 e SGK2.
Target
SGK1
(Cell-free assay)		 SGK2
(Cell-free assay)
62 nM 103 nM
In vitro GSK650394 inibisce il trasporto epiteliale mediato da SGK1 con un IC50 di 0,6 μM nel test SCC. Nelle cellule LNCaP, questo composto inibisce l'aumento della fosforilazione di Nedd4-2 mediato dagli androgeni e la crescita cellulare mediata dagli androgeni.Questa sostanza chimica contrasta la diminuzione della neurogenesi indotta dal cortisolo, i cambiamenti nella segnalazione Hedgehog e la traslocazione nucleare del GR. [2] Inibisce la replicazione del virus dell'influenza compromettendo l'esportazione delle vRNP dell'influenza nel citoplasma delle cellule A549.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Test di prossimità a scintillazione (SPA)

    SGK1 S422D (60–431 aa; concentrazione finale 0,275 μg/mL) o SGK2 (concentrazione finale 0,875 μg/mL) sono attivati da PDK1 (concentrazione finale 1,1 μg/mL) in un tampone composto da 50 mM Tris (pH 7,5), 0,1 mM EGTA, 0,1 mM EDTA, 10 mM MgCl2, 0,1% β-mercaptoetanolo, 1 mg/mL BSA e ATP (concentrazione finale di 0,15 mM) e incubato per 30 minuti a 30 °C. SGK2 è preparato esattamente come descritto per SGK1, tranne per il fatto che corrisponde alla proteina a lunghezza intera. Una soluzione contenente il peptide CROSStide biotinilato a una concentrazione finale di 75 μM e γ32P-ATP corrispondente a 2×106 cpm viene preparata nel tampone di reazione. In una piastra a 96 pozzetti, 5 μL di questo composto vengono aggiunti a 25 μL della miscela enzimatica attivata. Si aggiungono 20 μL della miscela CROSStide e si incuba per 1 ora a temperatura ambiente. Successivamente, si aggiungono 50 μL di una sospensione da 25 mg/mL di perline SPA rivestite di streptavidina in PBS con 0,1 M EDTA, pH 8,0. La piastra viene quindi sigillata e centrifugata per 8 minuti a 2000 rpm, e il segnale viene rilevato misurando per 30 secondi/pozzetto in un contatore a scintillazione Packard TopCount NXT. I valori IC50 dell'inibizione delle attività SGK1 e SGK2 da parte di questa sostanza chimica vengono calcolati da questi dati utilizzando il software GraphPad Prism 3.
Saggio cellulare:[1]
  • Linee cellulari

    LNCaP cells

  • Concentrazioni

    ~10 μM

  • Tempo di incubazione

    7 days

  • Metodo

    LNCaP cells are plated at a density of 5,000 cells per well in 96-well plates in 100 μL PRF-RPMI 1640, supplemented with 8% CS-FBS, 0.1 mM NEAA, and 1 mM NaPyr. At day three, cells are treated with hormone with or without GSK650394 by removing 50 μL of the media and replacing this with 50 μL of PRF-RPMI 1640 with 8% CS-FBS, NEAA, NaPyr containing a 2X concentration of the appropriate hormone/this compound treatment. At days 5 and 7, the treatment is repeated. On the tenth day, the media is removed and the relative cell number is measured using the FluoReporter Blue assay according to the manufacturer’s instructions.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18794135/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23650397/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23487453/

Convalida del prodotto da parte del cliente

BV-2 cells were incubated in the absence or presence of gsk650394 (1 μM) for 30 min, followed by LPS (500 ng/ml) administration for 30 min, and then fixed. NF-κB p65 protein was visualized by indirect immunofluorescence staining using an antibody for NF-κB p65. For nuclear staining, the cells were stained with DAPI. Bar = 20 μm.

Dati da [ , , Biochem Biophys Res Commun, 2016, 478(1):53-59 ]

GSK650394 treatment reduces steady state levels of BoHV-1 proteins. Cells were grown prior to infection. Three hours prior to infection 25 nM of GSK650394 was added to the designated cultures. CRIB cells were infected withBoHV-1 (moi=2) and then stripped FBS added. At the designated times after infection (hours), whole cell lysate (50 ug protein) was prepared and Western Blots performedusing the designated antibodies directed against a viral protein. Arrows denote the position of bICP0 (97 kD), bICP4 (178 kD), bICP22 (45 kD), VP16 (65 kD), and the bracketdenotes various gE forms. Tubulin was used as a loading control. The lane marked M are molecular weight markers: numbers to left are the approximate size of the respectivebands. These results are representative of 4 independent experiments. The relative levels of the respective BoHV-1 proteins were estimated by comparing the intensity ofthe bands to tubulin using a BioRad ChemiDoc MP and PMI System. The value of the respective viral protein that was first detected after infection was set at 10 and the othervalues normalized to this value. ND refers to those lanes in which the viral protein was not detected. These results are representative of three independent experiments.

Dati da [ , , Virus Res, 2016, 222:106-112. ]

Sellecks GSK650394 È stato citato da 24 Pubblicazioni

Patient-derived enteroids provide a platform for the development of therapeutic approaches in microvillus inclusion disease [ J Clin Invest, 2023, 133(20)e169234] PubMed: 37643022
Bacterial DNA promoting inflammation via the Sgk1/Nedd4L/Syk pathway in mast cells contributes to antihistamine non-responsive CSU [ J Leukoc Biol, 2023, qiad025] PubMed: 36857592
Estrogen-sensitive activation of SGK1 induces M2 macrophages with anti-inflammatory properties and a Th2 response at the maternal-fetal interface [ Reprod Biol Endocrinol, 2023, 21(1):50] PubMed: 37226177
Inhibition of SGK1 potentiates the anticancer activity of PI3K inhibitor in NSCLC cells through modulation of mTORC1, p‑ERK and β‑catenin signaling [ Biomed Rep, 2023, 19(6):94] PubMed: 37901878
Therapy Development for Microvillus Inclusion Disease using Patient-derived Enteroids [ bioRxiv, 2023, 2023.01.28.526036] PubMed: 36747680
Activation of Serum/Glucocorticoid Regulated Kinase 1/Nuclear Factor-κB Pathway Are Correlated with Low Sensitivity to Bortezomib and Ixazomib in Resistant Multiple Myeloma Cells [ Biomedicines, 2021, 9(1)E33] PubMed: 33406639
Identification and Kinetic Characterization of Serum- and Glucocorticoid-Regulated Kinase Inhibitors Using a Fluorescence Polarization-Based Assay [ SLAS Discov, 2021, 24725552211002465] PubMed: 33783250
Crosstalk between Hedgehog pathway and the glucocorticoid receptor pathway as a basis for combination therapy in T-cell acute lymphoblastic leukemia [ Oncogene, 2020, 10.1038/s41388-020-01453-2] PubMed: 32917954
Convergent genomic and pharmacological evidence of PI3K/GSK3 signaling alterations in neurons from schizophrenia patients [ Neuropsychopharmacology, 2020, 10.1038/s41386-020-00924-0] PubMed: 33288841
Targeting histone K4 trimethylation for treatment of cognitive and synaptic deficits in mouse models of Alzheimer's disease [ Sci Adv, 2020, 6(50)eabc8096] PubMed: 33298440

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