GSK3787

GSK3787 antagonizza irreversibilmente il PPARδ umano e murino che modifica covalentemente Cys249 all'interno della tasca di legame del ligando. Questo composto (1 μM) antagonizza efficacemente la trascrizione stimolata dall'agonista GW0742 di CPT1a e PDK4 nelle cellule muscolari scheletriche umane, e antagonizza efficacemente l'espressione genica basale di CPT1a. Non mostra alcuna attività antiproliferativa efficace contro le cellule di cancro colorettale. [1]

Questa sostanza chimica (1 μM) antagonizza completamente l'espressione genica di Angptl4 dipendente da PPARβ/δ indotta da 50 nM GW0742 nei fibroblasti wild-type e nei cheratinociti. Essa (1 μM) antagonizza ampiamente l'espressione degli mRNA di Angptl4 e Adrp indotta da 50 nM GW0742 nella cellula di cancro della pelle A341. Questo composto (1 μM) antagonizza ampiamente l'espressione degli mRNA di Angptl4 indotta da GW0742 nelle linee cellulari tumorali MCF7 (seno), Huh7 (fegato) e HepG2 (fegato), ma non nelle cellule H1838 o A549 (polmone). Essa (1 μM) antagonizza ampiamente l'aumento dell'mRNA di Adrp indotto da GW0742 nelle cellule Huh7 e HepG2, ma non nelle cellule H1838. Questa sostanza chimica non antagonizza l'espressione basale di nessuno di questi due geni bersaglio di PPARβ/δ in queste cellule. Né GW0742 né questo composto hanno alcun effetto sulla proliferazione cellulare di queste cellule a concentrazioni che vanno da 0,1 a 10 μM. È in grado di modulare l'associazione di entrambi i peptidi coregolatori di PPARβ/δ e PPARγ in risposta all'attivazione del ligando. L'efficacia di questa sostanza chimica nel modulare l'attività di PPARγ è marcatamente inferiore all'efficacia di essa nell'agire come antagonista di PPARβ/δ. [2]

GSK3787 antagonizza l'espressione genica dipendente da PPARβ/δ indotta da ligando in vivo. La somministrazione orale di questo composto non ha alcun effetto sull'espressione degli mRNA di Angptl4 e Adrp nell'epitelio del colon di topo. La co-somministrazione di questa sostanza chimica (10 mg/kg) previene efficacemente l'espressione indotta da GW0742 di entrambi gli mRNA di Angptl4 e Adrp nell'epitelio del colon di topo wild-type, il che è correlato a una ridotta occupazione del promotore di PPARβ/δ sui geni Angptl4 e Adrp. La somministrazione di questo composto non ha avuto alcun effetto sulla tolleranza al glucosio. [2]

• Saggio di legame di saturazione

  Utilizzando piastre di coltura a 96 pozzetti, 50 nM di LBD di PPARG umano purificato e la concentrazione desiderata di [³H]GW3738 vengono diluiti in un volume totale di 100 μL con un tampone costituito da 50 mM KCl, 5 mM EDTA, 10 mM ditiotreitolo (DTT), 50 mM HEPES, a pH 7. I saggi di legame di saturazione vengono condotti utilizzando concentrazioni di questo composto che vanno da 1 a 250 nM. Il legame non specifico a ciascuna concentrazione di [³H]GW3738 viene stimato in incubazioni parallele contenenti 50 μM di GW 3738 non marcato. Le piastre vengono incubate per 2 h a temperatura ambiente. Il ligando libero viene separato dal ligando legato al recettore mediante cromatografia di esclusione dimensionale utilizzando colonne di centrifugazione a 96 pozzetti disponibili in commercio. Campioni (50 μL) da ogni pozzetto di una singola piastra di prova vengono caricati su un blocco di filtrazione su gel a 96 pozzetti equilibrato con tampone e temperatura. Il blocco viene posizionato sopra una microtiter plate pulita e centrifugato a 1100 g per 4 min. Il liquido di scintillazione (180 μL) viene aggiunto a ogni pozzetto della piastra contenente l'eluato, e le piastre vengono sigillate e lasciate equilibrare per almeno 4 h prima della conta in un contatore. La quantità di legame non specifico a ciascuna concentrazione di [³H]GW3738 viene sottratta da tutti i pozzetti e vengono costruiti grafici della concentrazione di questa sostanza chimica rispetto ai conteggi per minuto (cpm) legati. I valori di K_d per [³H]GW3738 vengono determinati da un'analisi di regressione non lineare dei minimi quadrati dei dati a un semplice modello di legame.