GSK126

N. catalogoS7061 Lotto:S706109

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Dati tecnici

Formula

C31H38N6O2
Peso molecolare 526.67 Numero CAS 1346574-57-9
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 5 mg/mL (9.49 mM)
Ethanol 4 mg/mL (7.59 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione GSK126 (GSK2816126A, GSK2816126) è un potente inibitore altamente selettivo della EZH2 methyltransferase con un IC50 di 9,9 nM, >1000 volte più selettivo per EZH2 rispetto ad altre 20 metiltransferasi umane.
Target
EZH2
(Cell-free assay)
9.9 nM
In vitro In vitro, GSK126 inibisce più potentemente H3K27me3, seguito da H3K27me2 sia nelle linee cellulari DLBCL di tipo selvaggio che mutanti di EZH2. Questo composto inibisce anche efficacemente la proliferazione delle linee cellulari DLBCL mutanti di EZH2 e induce l'attivazione trascrizionale dei geni bersaglio di EZH2 nelle linee cellulari sensibili. Nelle cellule mutanti A687V EZH2, questo trattamento si traduce in una diminuzione globale di H3K27me3, robusta attivazione genica, attivazione della caspasi e diminuzione della proliferazione. Nelle cellule parentali H2087, inibisce l'espressione di VEGF-A e della Ser(473)-AKT fosforilata, e quindi causa l'inibizione della proliferazione, migrazione e metastasi cellulare.
In vivo In topi portatori di xenotrapianti KARPAS-422 e Pfeiffer, GSK126 (150 mg/kg/d, i.p.) diminuisce il H3K27me3 globale, aumenta l'espressione genica e quindi causa una marcata regressione tumorale.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggio EZH2

    Il complesso PRC2 a cinque membri (Flag–EZH2, EED, SUZ12, AEBP2, RbAp48) contenente EZH2 di tipo selvaggio o mutante viene preparato. GSK126 viene sciolto in DMSO e testato a concentrazioni da 0,6 nM a 300 nM con una concentrazione finale di DMSO del 2,5%. A differenza dell'EZH2 di tipo selvaggio che preferisce H3K27me0 come substrato in vitro, i mutanti Y641 di EZH2 preferiscono H3K27me2 e hanno poca attività con H3K27me0 o H3K27me1. Il mutante A677G è distinto sia dalle forme wild-type che mutanti Y641 di EZH2 in quanto metila efficacemente H3K27me0, H3K27me1 e H3K27me2; pertanto, i peptidi di istone H3 (residui 21-44; 10 μM finali) con K27me0 (wild type, A677G EZH2), K27me1 (A677G EZH2) o K27me2 (A677G, Y641N, Y641C, Y641H, Y641S e Y641F EZH2) sono usati come substrati di metiltransferasi. Questo composto viene aggiunto alle piastre seguito dall'aggiunta di 6 nM di complesso EZH2 e peptide. Poiché la potenza di questa sostanza chimica è al limite o vicino al limite di legame stretto di un saggio eseguito a [SAM] = Km, i valori di IC50 vengono misurati ad alta concentrazione del substrato competitivo SAM rispetto al suo Km (7,5 μM SAM dove il Km di SAM è 0,3 μM). In queste condizioni, il contributo della concentrazione enzimatica diventa relativamente piccolo e possono essere calcolate stime accurate di Ki. Le reazioni vengono avviate con [3H]-SAM, incubate per 30 minuti, bloccate con l'aggiunta di un eccesso 500 volte di SAM non marcato, e il peptide prodotto metilato viene catturato su filtri di fosfocellulosa secondo il protocollo fornito dal fornitore per le piastre MSPH Multiscreen. Le piastre vengono lette su un TopCount dopo l'aggiunta di 20 μL di cocktail Microscint-20. I valori apparenti di Ki vengono calcolati usando la relazione di Cheng–Prusoff per un inibitore competitivo. IC50=Ki (1+[S]/Km)+[E]/2, dove E è l'enzima e S è il substrato.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    46 lymphoma cell lines

  • Concentrazioni

    0~10 μM

  • Tempo di incubazione

    6 days

  • Metodo

    The optimal cell seeding is determined empirically for all cell lines by examining the growth of a wide range of seeding densities in a 384-well format to identify conditions that permitted proliferation for 6 days. Cells are then plated at the optimal seeding density 24 h before treatment (in duplicate) with a 20-point two fold dilution series of GSK126 or 0.15% DMSO. Plates are incubated for 6 days at 37°C in 5% CO2. Cells are then lysed with CellTiter-Glo (CTG) and chemiluminescent signal is detected with a TECAN Safire2 microplate reader. In addition, an untreated plate of cells is harvested at the time of compound addition (T0) to quantify the starting number of cells. CTG values obtained after the 6 day treatment are expressed as a percent of the T0 value and plotted against this compound concentration. Data are fit with a four-parameter equation to generate a concentration response curve and the concentration of this chemical required to inhibit 50% of growth (growth IC50) is determined.
Studio sugli animali:

[1]
  • Modelli animali

    Female beige SCID mice bearing Pfeiffer or KARPAS-422 tumors

  • Dosaggi

    150 mg/kg/day

  • Somministrazione

    i.p.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23051747/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25253781/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25477340/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>(C) Four GCBDLBCL cells lines [1 wild-type (wt), 3 mutated (mut) EZH2] were treated with 500 nmol/l BAY 1238097 or with an EZH2 inhibitor (DZNep and GSK126, both used at the concentration of 500 nmol/l) as single agents and in combination for 72 h. The arrow indicates the EZH2 correct band. Dimethyl sulphoxide (DMSO) alone was added as negative control cells. Membranes were hybridized with antibodies against EZH2, H3K27me3, histone H3 and GAPDH.</p>

, , Br J Haematol, 2017, 178(6):936-948

HeLa cells were transfected with NS (nonspecific) or EZH2-specific siRNA for 48 h with protease inhibitors (10 μM E64 and 10 μM pepstatin-A). Cells were stained with LC3B antibody (green) and DAPI, and observed under confocal microscopy for LC3B puncta. Scale bars: 10 μm

Dati da [ , , Autophagy, 2015, 11(12):2309-22. ]

Concentration-dependent cytotoxic effect of candidate therapeutics. a. KMBC (blue circles) and HuCCT1 (purple squares) cells and b: haploid BAP1 knockout (HAP1 BAP1 KO) (green circles) or parental haploid HAP1 cells (WT) (orange squares) were plated in 384-well plates (1,000 cells/well), and incubated with varying concentrations of the indicated drug. Cell viability was assessed after 72 h using Cell Titer GloR 2.0 assay. Data represents the average percent cell viability plotted against concentration of drug in nM from 4 replicates for each condition. The table indicates the inhibitory concentration at 50% effect (IC50) values for each drug for each of the cell lines

Dati da [ , , Mol Cancer, 2017, 16(1):22 ]

immunostaining (D) show reduced levels of H3K27me3 with increasing levels of GSK126.

Dati da [ , , Mol Cancer Res, 2018, 16(3):417-427 ]

Sellecks GSK126 È stato citato da 181 Pubblicazioni

FAK signaling suppression by OCT4-ITGA6 mediates the effectively removal of residual pluripotent stem cells and enhances application safety [ Theranostics, 2025, 15(14):7127-7153] PubMed: 40585989
Crosstalk between chromatin state and ATM signalling in DNA damage-induced transcription stress [ EMBO J, 2025, 10.1038/s44318-025-00537-7] PubMed: 40859031
Differential regulation of FADS2 by EZH2 reveals a metabolic vulnerability in ovarian cancer treatment [ EBioMedicine, 2025, 119:105879] PubMed: 40818202
Chromatin modification abnormalities by CHD7 and KMT2C loss promote medulloblastoma progression [ Cell Rep, 2025, 44(5):115673] PubMed: 40393452
EZH2 inhibition sensitizes MYC-high medulloblastoma cancers to PARP inhibition by regulating NUPR1-mediated DNA repair [ Oncogene, 2025, 44(6):391-405] PubMed: 39562655
Epigenetic reprogramming via EZH2 inhibition rescues fibroadipose pathogenesis in secondary lymphedema through activating PPARγ signaling [ J Orthop Translat, 2025, 55:309-322] PubMed: 41079990
BRAFV600E maintains the CpG island methylator phenotype, and DNA methylation of PRC2 targets genes in colon cancer [ iScience, 2025, 28(7):112905] PubMed: 40678543
Inhibiting EZH2 complements steroid effects in Duchenne muscular dystrophy [ Sci Adv, 2025, 11(11):eadr4443] PubMed: 40085707
Suppressed macrophage response to quorum-sensing-active Streptococcus pyogenes occurs at the level of the nucleus [ bioRxiv, 2025, 2025.02.07.637189] PubMed: 39975246
Protocol for differentiating cardiomyocytes and generating engineered heart tissues from human feeder-free extended pluripotent stem cells [ STAR Protoc, 2025, 6(1):103576] PubMed: 39893639

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