Entospletinib (GS-9973)

Entospletinib (GS-9973) mostra una buona permeabilità bidirezionale attraverso monostrati di cellule Caco-2 in vitro. Nelle cellule, mostra anche un'eccellente selettività per Syk e inibisce potentemente l'attivazione e la proliferazione delle cellule B mediate dal BCR, nonché la produzione di citochine stimolata da immunocomplessi nei monociti. [1] La combinazione di questo composto inibisce sinergicamente la vitalità delle cellule CLL e interrompe ulteriormente la segnalazione delle chemochine. [2]

Entospletinib (GS-9973) (1 mg/kg p.o.) mostra una biodisponibilità da moderata ad alta nel ratto e nel cane. In un modello di artrite indotta da collagene nel ratto, (1-10 mg/kg p.o.) inibisce significativamente l'infiammazione della caviglia. Inoltre, questo composto mostra anche attività modificante la malattia in molteplici misurazioni istologiche, inclusa l'inibizione della formazione di panno, del danno cartilagineo, del riassorbimento osseo e della formazione di osso periostale con ED50 che vanno da 1,2 a 3,9 mg/kg. [1]

• Saggi chinasici

  L'attività chinasica di Syk a lunghezza intera espressa da baculovirus è misurata in un formato di saggio basato su Lance in un volume finale di 25 μL contenente 25 mM Tris–HCl, pH 7,5, 5 mM β-glicerofosfato, 2 mM DTT, 0,1 mM Na₃VO₄, 10 mM MgCl₂, 0,5 μM di substrato peptidico biotinilato Promega PTK 1, 0,01% caseina, 0,01% Triton X-100 e 40 mM ATP (Km per ATP) incubato a temperatura ambiente per 60 min. Le reazioni sono interrotte con l'aggiunta di 30 mM EDTA contenente 30 μL di SA-APC e 4 nM di anticorpo PT-66 e le piastre misurate su un Perkin-Elmer Envision. I valori di IC50 per Entospletinib (GS-9973) sono determinati utilizzando un algoritmo di regressione lineare a quattro parametri.

• Linee cellulari

  MV-4-11 cells

• Concentrazioni

  ~10 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Functional impact on cellular Flt3 activity is determined by measuring the inhibition of MV-4-11 cell proliferation by Entospletinib (GS-9973). A total of 104 cells are diluted in RPMI medium containing 10% FBS in 96-well flat-bottomed tissue culture plates and incubated with compound dilutions for 72 h at 37 癈. Alamar blue (10%) is added to the cells, which were incubated for an additional 12-18 h at 37 癈, and inhibition of the relative cell numbers is determined by spectrophotometer readings at 570/600 nm.

• Modelli animali

  Rat Collagen-Induced Arthritis (CIA) Model

• Dosaggi

  ~10 mg/kg bid

• Somministrazione

  p.o.