Fostamatinib disodium hexahydrate

R788 è un profarmaco dell'inibitore della tirosina chinasi della milza (Syk) R406. R788 è un inibitore competitivo per il legame dell'ATP con un Ki di 30 nM. R788 inibisce la degranulazione di CHMC mediata dall'anti-IgE in modo dose-dipendente con un EC50 di 56 nM. R788 inibisce anche la produzione e il rilascio di LTC4 e citochine e chemochine indotte dall'anti-IgE, inclusi TNFα, IL-8 e GM-CSF. L'inibizione di Syk da parte di R788 porta all'inibizione di tutti gli eventi di fosforilazione a valle della segnalazione di Syk. Oltre alla segnalazione di FcϵRI in CHMC, R788 inibisce più potentemente la segnalazione dei recettori IL-4 e IL-2. R788 inibisce specificamente la segnalazione di FcγR nelle mastcellule, macrofagi e neutrofili umani. R788 può inibire il danno infiammatorio locale mediato da complessi immuni.[1] R788 induce l'apoptosi della maggior parte delle linee cellulari DLBCL esaminate. Nelle linee cellulari DLBCL sensibili a R788, R788 inibisce specificamente la segnalazione BCR sia tonica che indotta da ligando (autofosforilazione di SYK525/526 e fosforilazione SYK-dipendente della proteina linker delle cellule B [BLNK]).[2]

La somministrazione orale di R788 a topi riduce l'infiammazione mediata da complessi immuni in una reazione di Arthus passiva inversa e due modelli di artrite indotta da anticorpi.[1] In un altro studio, R788 inibisce efficacemente la segnalazione di BCR in vivo, con conseguente riduzione della proliferazione e della sopravvivenza delle cellule B maligne e prolunga significativamente la sopravvivenza degli animali trattati.[3] R788 dimostra una significativa riduzione dei principali mediatori infiammatori come TNFalpha, IL-1, IL-6 e IL-18, portando a una riduzione dell'infiammazione e della degradazione ossea in modelli di artrite reumatoide.[4]

• Saggio chinasico di polarizzazione di fluorescenza e determinazione del Ki

  Vengono eseguite le reazioni di polarizzazione della fluorescenza. Per la determinazione del K_i, vengono allestite reazioni duplicate da 200 μL a otto diverse concentrazioni di ATP a partire da 200 μM (diluizioni seriali a 2 volte) in presenza di DMSO o R788 a 125, 62,5, 31,25, 15,5 o 7,8 nM. A diversi punti temporali, 20 μL di ciascuna reazione vengono rimossi e spenti per interrompere la reazione. Per ogni concentrazione di R788, viene determinato il tasso di reazione a ciascuna concentrazione di ATP e tracciato contro la concentrazione di ATP per determinare i K_m e V_max apparenti. Infine, il K_m apparente (o K_i apparente/V_max) viene tracciato contro la concentrazione dell'inibitore per determinare il K_i.

• Linee cellulari

  Cultured human mast cells (CHMC)

• Concentrazioni

  0-100 μM

• Tempo di incubazione

  0.5 h

• Metodo

  Cultured human mast cells (CHMC) are derived from cord blood CD34⁺ progenitor cells and grown, primed, and stimulated and shown in supplemental data. Before stimulation, cells are incubated with R788 or DMSO for 30 minutes. Cells are then stimulated with either 0.25 to 2 mg/mL anti-IgE or anti-IgG or 2 μM ionomycin. For tryptase measurement, ~1500 cells per well are stimulated for 30 min in modified Tyrode's buffer. For LTC4 and cytokine production, 100,000 cells per well are stimulated for 1 or 7 hours, respectively. Tryptase activity is measured by luminescence readout of a peptide substrate, and LTC4 and cytokines are measured using Luminex multiplex technology.

• Modelli animali

  Balb/c mice with arthritis

• Dosaggi

  1 mg/kg or 5 mg/kg

• Somministrazione

  o.g.