Flavopiridol (Alvocidib) HCl

N. catalogoS2679 Lotto:S267904

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Dati tecnici

Formula

C21H20ClNO5.HCl
Peso molecolare 438.3 Numero CAS 131740-09-5
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 88 mg/mL (200.77 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Flavopiridol (Alvocidib) HCl compete con l'ATP per inibire le CDK, incluse CDK1, CDK2, CDK4 e CDK6 con una IC50 di ~ 40 nM in saggi acellulari. È 7,5 volte più selettivo per CDK1/2/4/6 rispetto a CDK7. Flavopiridol è inizialmente riscontrato inibire EGFR e PKA. Flavopiridol HCl induce Autophagy e stress del RE. Flavopiridol HCl blocca la replicazione di HIV-1. Fase 1/2.
Target
CDK1
(Cell-free assay)		 CDK2
(Cell-free assay)		 CDK4
(Cell-free assay)		 CDK6
(Cell-free assay)		 CDK7
(Cell-free assay)
40 nM 40 nM 40 nM 40 nM 300 nM
In vitro Il Flavopiridol è inizialmente scoperto per inibire il recettore del fattore di crescita epidermico e la proteina chinasi A (IC50 = 21 e 122 μM). Successivamente, il Flavopiridol si dimostra in grado di inibire la proliferazione Cell Cycle, a concentrazioni più fisiologicamente rilevanti (IC50 = 66 nM) quando il Flavopiridol viene testato nel pannello del National Cancer Institute Development Therapeutics Program di 60 linee Cell Cycle tumorali umane. Il Flavopiridol induce l'arresto in G1 con inibizione di CDK2 e CDK4 nelle Cell Cycle di carcinoma mammario umano in modo dipendente dal tempo e dalla concentrazione. Il trattamento a breve termine con Flavopiridol (circa 12 ore) induce apoptosi nelle linee Cell Cycle ematopoietiche, inclusi SUDHL4, SUDHL6 (linee Cell Cycle B), Jurkat e MOLT4 (linee Cell Cycle T) e HL60 (mieloide). Nel saggio clonogenico, il Flavopiridol funziona come un composto citotossico altamente potente con una IC70 media di 8 ng/mL in 23 modelli di tumori umani. Uno studio recente mostra che il trattamento con Flavopiridol induce una sostanziale fosforilazione di AKT-Ser473 nella linea Cell Cycle di glioblastoma umano T98G.
In vivo Alla dose massima tollerata di 10 mg/kg/giorno somministrata p.o. nei giorni 1-4 e 7-11, Flavopiridol provoca la regressione del tumore in PRXF1337 e la stasi tumorale per 4 settimane in PRXF1369. Dopo il trattamento con 7,5 mg/kg di Flavopiridol in bolo endovenoso (IV) o intraperitoneale per 5 giorni consecutivi, 11 su 12 xenotrapianti sottocutanei (s.c.) umani di HL-60 in fase avanzata subiscono regressioni complete, e gli animali rimangono liberi da malattia per diversi mesi dopo un ciclo di trattamento con Flavopiridol. I linfomi s.c. SUDHL-4 trattati con Flavopiridol a 7,5 mg/kg in bolo IV per 5 giorni subiscono una regressione maggiore (due su otto topi) o completa (quattro su otto topi), con due animali che rimangono liberi da malattia per più di 60 giorni. Il ritardo complessivo della crescita è del 73,2%. La somministrazione giornaliera IV o IP di Flavopiridol determina livelli plasmatici di picco di circa 7 µM, seguiti da un progressivo declino a circa 100 nM in 8 ore.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Reazioni chinasiche di CDKs ricombinanti

    Le attività delle CDKs vengono determinate in piastre a micropozze come segue. Quarantamila μg di Gst-Rb vengono miscelati con diverse quantità di Flavopiridol e ATP non marcato. Le reazioni vengono quindi avviate con l'aggiunta di una frazione S100 ottenuta da Cell Cycle di insetti che esprimono CDKs umane ricombinanti, dopo taglio con solfato di ammonio. Le condizioni finali di reazione sono 10 mM MgCl2, 50 mM Tris-HCl (pH 7,5) e 1 mM DTT. La concentrazione finale di ATP viene regolata di conseguenza. L'ATP radiomarcato viene utilizzato come donatore di fosforile. La reazione viene condotta per 2,5 minuti a 30 °C dopo l'aggiunta dell'enzima e quindi terminata con l'aggiunta di EDTA. Il Gst-Rb viene quindi catturato con glutatione-Sepharose e la radioattività incorporata viene determinata mediante conteggio a scintillazione liquida.
Saggio cellulare:[2]
  • Linee cellulari

    SUDHL4, SUDHL6, Jurkat, MOLT4, and HL60

  • Concentrazioni

    0, 100 500, 5000 nM

  • Tempo di incubazione

    14 hours

  • Metodo

    Cells grown at a density of 1 × 106 cells/mL are exposed to Flavopiridol for different concentrations and time periods. DNA is extracted. Briefly, cells are washed once with cold phosphate-buffered saline (PBS) and lysed with 3 mL lysis buffer (5 mM Tris-HCL [pH 7.5]; 20 mM EDTA; 0.5% Triton X-100) for 15 minutes at 4 °C. The chromatin of the cell lysates is isolated by centrifugation (20 minutes at 26,000g, 4 °C). The supernatants containing small DNA fragments are extracted sequentially with phenol, phenol:chloroform (1:1), and chloroform. Nucleic acids are precipitated in 0.5 M NaCl, 90% ethanol at -20 °C overnight. RNA is then digested by bovine RNAaseA (60 μg/mL). After sequential reextraction and reprecipitation, DNA is dissolved in 10 mM Tris-HCL (pH 7.5), 1 mM EDTA, 0.5% sodium dodecyl sulfate (SDS) before electrophoresis on 1.6% agarose gel.

Studio sugli animali:[4] [6]
  • Modelli animali

    Human prostate cancer xenografts, PRXFI337 and PRXFI369, grown s.c. in nude mice [4] Human promyelocytic leukemia HL-60, human B-cell follicular lymphoma SUDHL-4, and acquired immunodeficiency syndrome (AIDS)-r

  • Dosaggi

    10 mg/kg/d [4]; 7.5 mg/kg/d [6]

  • Somministrazione

    p.o.[4]; i.p. or i.v. [6]

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12165651/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8674031/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9427698/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9815683/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22391209/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9516149/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>Comparative efficacy of anticancer therapies (Flavopiridol, vincristine, daunorubicin, et al.) in NMC vs non-NMC cell lines. Mean IC50 (± s.e.m.) of the indicated agents in three NMC (PER-403, PER-624, and PER-704) and two non-NMC cell lines (PER-535 and SAOS2), ***P<0.001, unpaired t-test, corrected for multiple testing.</p>

Dati da [ Br J Cancer , 2014 , 110(5), 1189-98 ]

RPMI-8226 cells were treated with the indicated CDK inhibitors for 8 hours. Western blots are shown. The following drug concentrations were used: SLM6 at 250 nM, flavopiridol at 250 nM, roscovitine at 5 uM, purvalanol A at 10 uM, and alsterpaullone at 5 uM.

Dati da [ Mol Cancer Ther , 2012 , 11(11), 2321-2330 ]

<p>(C) In vivo treatment of Tg:Pomc-Pttg;Pomc-eGFP embryos with small-molecule CDK inhibitors (50μM) or 0.2% DMSO as control from 18 to 40 hpf. One hundred to one hundred fifty embryos were treated with each compound. Representative images of live embryos are shown with gross morphology (Right) and pituitary Pomc-GFP–positive cells at higher magnification (Left) at 40 hpf. Embryos exposed to flavopiridol developed early developmental defect before pituitary POMC cell ontogeny occurs. (D) Relative expression of pituitary Pomc-eGFP fluorescence analyzed using Volocity 5.2 software (Improvision; mean ± SE of relative expression, n = 7). (E) R-roscovitine specifically suppresses expansion of pituitary POMC cells overexpressing zPttg from 18 to 48 hpf. Double transgenic Tg:Pomc-Pttg;Prl-RFP embryos were generated by breeding Tg:Pomc-Pttg fish with a previously generated PRL-RFP transgenic line, in which RFP was targeted to pituitary lactotrophs by a zebrafish Prolactin promoter (34). Representative fluorescent microscopy of pituitary POMC-eGFP (a and b) and PRL-RFP (c and d) expression in live Tg:Pomc-Pttg; Pomc-eGFP and Tg:Pomc-Pttg;Prl-RFP embryos treated with 0.2% DMSO (a and c) or 50 μM R-roscovitine (b and d). (F) Relative expression of pituitary POMC-eGFP or PRL-RFP fluorescence were analyzed (mean ± SE of relative expression; n = 10). Results represent one of three similar experiments;*P < 0.02 and **P < 0.000005. (Scale bar, 50 μm.)</p><div><div> </div></div><p> </p>

Dati da [ PNAS , 2011 , 108, 8417 ]

Sellecks Flavopiridol (Alvocidib) HCl È stato citato da 61 Pubblicazioni

Monoallelically expressed noncoding RNAs form nucleolar territories on NOR-containing chromosomes and regulate rRNA expression [ Elife, 2024, 13e80684] PubMed: 38240312
From co-delivery to synergistic anti-inflammatory effect: Studies on chitosan-stabilized Janus emulsions having chloroquine phosphate and flavopiridol in Complete Freund's Adjuvant induced arthritis rat model [ Int J Biol Macromol, 2023, 258(Pt 1):128776] PubMed: 38114014
Claspin is Required for Growth Recovery from Serum Starvation through Regulating the PI3K-PDK1-mTOR Pathway in Mammalian Cells [ Mol Cell Biol, 2023, 43(1):1-21] PubMed: 36720467
Lamin A/C phosphorylation at serine 22 is a conserved heat shock response to regulate nuclear adaptation during stress [ J Cell Sci, 2023, 136(4)jcs259788] PubMed: 36695453
Brd4-dependent CDK9 expression induction upon sustained pharmacological inhibition of P-TEFb kinase activity [ Biochem Biophys Res Commun, 2023, 671:75-79] PubMed: 37295357
The super elongation complex drives transcriptional addiction in MYCN-amplified neuroblastoma [ Sci Adv, 2023, 9(13):eadf0005] PubMed: 36989355
Single-cell T cell receptor sequencing of paired human atherosclerotic plaques and blood reveals autoimmune-like features of expanded effector T cells [ Nat Cardiovasc Res, 2023, 2(2):112-125] PubMed: 38665903
Nuclear oligo hashing improves differential analysis of single-cell RNA-seq [ Nat Commun, 2022, 13(1):2666] PubMed: 35562344
p300/CBP sustains Polycomb silencing by non-enzymatic functions [ Mol Cell, 2022, 82(19):3580-3597.e9] PubMed: 36206738
Discovery of a large-scale, cell-state-responsive allosteric switch in the 7SK RNA using DANCE-MaP [ Mol Cell, 2022, S1097-2765(22)00114-9] PubMed: 35320755

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