RAD001 (Everolimus)

N. catalogoS1120 Lotto:S112025

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Dati tecnici

Formula

C53H83NO14
Peso molecolare 958.22 Numero CAS 159351-69-6
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (104.36 mM)
Ethanol 100 mg/mL (104.36 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Everolimus è un inibitore di mTOR di FKBP12 con IC50 di 1,6-2,4 nM in un saggio senza cellule. Everolimus induce l'apoptosi e l'autofagia cellulare e inibisce la proliferazione delle cellule tumorali.
Target
FKBP12
(Cell-free assay)		 mTOR (FKBP12)
(Cell-free assay)
1.6-2.4 nM 1.6 nM-2.4 nM
In vitro Everolimus mostra un'attività immunosoppressiva paragonabile a quella della rapamicina. Questo composto compete con FK 506 immobilizzato per il legame con FKBP12 biotinilata e mostra l'effetto inibitorio su una MLR bidirezionale eseguita con cellule spleniche di topi BALB/c e CBA con IC50 di 0,12-1,8 nM. Mostra anche effetti antiangiogenici/vascolari nella proliferazione di HUVEC indotta da VEGF con IC50 di 0,12 nM e nella proliferazione di HUVEC indotta da bFGF con IC50 di 0,8 nM, rispettivamente. Uno studio recente mostra che questa sostanza chimica presenta effetti inibitori dose-dipendenti sia sulle cellule totali che sulle cellule staminali della linea cellulare BT474 e sulle cellule primarie di cancro al seno con IC50 di 156 nM nelle cellule totali delle cellule primarie di cancro al seno e di 71 nM nelle cellule totali delle cellule BT474. Inoltre, il trattamento combinato con questo composto e trastuzumab produce un'inibizione significativamente aumentata della crescita delle cellule staminali tumorali con un tasso di inibizione aumentato di oltre il 50 %.
In vivo Everolimus (da 0,1 a 10 mg/kg) inibisce in modo dose-dipendente la crescita delle metastasi primarie (orecchio) e dei linfonodi del melanoma B16/BL6, con una diminuzione del numero totale di vasi e una riduzione dei vasi maturi. In un modello animale di xenotrapianto di cellule staminali BT474, questo composto mostra significative riduzioni delle dimensioni medie del tumore (590,6 mm3), rispetto al gruppo di controllo con una dimensione del tumore di 698 mm3. Inoltre, il trattamento combinato con questo composto e trastuzumab diminuisce significativamente la dimensione del tumore del xenotrapianto (410,8 mm3) più del trattamento con questo composto da solo.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Saggio di legame FKBP12 e reazione linfocitaria mista (MLR)

    Saggio di legame FKBP12: Il legame alla proteina di legame FK 506 (FKBP12) è indirettamente valutato mediante un saggio di competizione di tipo ELISA. FK 506 è incluso in ogni singolo esperimento come standard e l'attività inibitoria è espressa come IC50 relativa rispetto a FK 506 (rIC50 = IC50 di questo composto/IC50 FK 506). Reazione linfocitaria mista (MLR): Le attività immunosoppressive di RAP e dei suoi derivati sono valutate in una MLR bidirezionale, utilizzando cellule spleniche di topi BALB/c e CBA. RAP è incluso in ogni singolo esperimento come standard e l'attività inibitoria è espressa come IC50 relativa rispetto a RAP (rIC50 = IC50 di questo composto/IC50 RAP).
Saggio cellulare:[3]
  • Linee cellulari

    BT474 cell line and the primary breast cancer cells

  • Concentrazioni

    0.001-10 μM

  • Tempo di incubazione

    24 hours

  • Metodo

    The 3-(4-5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide dye reduction assay (MTT assay) is used to compare the effects of Everolimus or trastuzumab on total breast cancer cells and breast CSCs. The total cells and the stem cells from the BT474 cell line and the primary breast cancer cells are respectively seeded into 96-well plates with different concentrations of the drugs, with five wells for each concentration, and the cells are cultured at 37 °C with 5 % CO2 in an incubator for 24 hours. The concentrations of this compound are 1 nM, 10 nM, 100 nM, 1 μM and 10 μM, and the concentrations of trastuzumab are 0.5 μg/mL, 1 μg/mL, 10 μg/mL, 50 μg/mL, and 100 μg/mL. The combinatorial inhibitory effect of this compound and Trastuzumab on the in vitro growth of breast CSCs is examined by MTT assay as well using 10 μg/mL trastuzumab in combination of increasing concentrations of this chemical (1 nM, 10 nM, 100 nM and 1 μM). After drug treatment for 24 hours, 20 μL MTT [5 mg/mL in phosphate buffered saline (PBS)] is added to each well, and the cells are incubated at 37 °C with 5 % CO2 and saturated humidity for 4 hours. Following the subsequent removal of the supernatant, 150 μL dimethyl sulfoxide (DMSO) is added to each well, and the cells are vortexed for 10 minutes. The light absorbance (OD value) is measured for each well using an ELISA reader. Each experiment is repeated in triplicate, and dose–response curves are plotted. The probit software of the statistical software package SPSS 17.0 for Windows is used to calculate the inhibitory concentration (IC50) of this compound.
Studio sugli animali:[3]
  • Modelli animali

    Cultured BT474 stem cells are injected beneath the left breast pad of BALB/c nude mice.

  • Dosaggi

    ≤2 mg/kg

  • Somministrazione

    Administered via p.o.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9723437/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19223496/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22492237/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16033851/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18708754/

Convalida del prodotto da parte del cliente

Cytoskeleton organisation of 786-O SuR treated with NVP-LDE225 (2.5 uM), everolimus (1 uM), and their combination for 24 h was analysed by confocal microscopy. Actin-based structures were revealed by rhodaminated phalloidin staining (red fluorescence). Localisation of focal adhesion points was obtained by immunofluorescent staining of p-paxillin (green fluorescence). Merged row images show overlapping of p-paxillin and actin signals. Moreover, all captures were shown in transmitted light. Scale bars, 10 um.

Dati da [ Br J Cancer , 2014 , 111(6), 1168-79 ]

Treatment of the BRAFi-resistant melanoma cells with the mTOR inhibitor RAD001 did lead to substantial decrease of S6 phosphorylation in the 3 BRAFi-resistant lines K028PR, M34PR, and K029PR; however, such an inhibition failed to elicit any inhibitory effect on the expression of PD-L1.

Dati da [ Clin Cancer Res , 2013 , 19(3),598-609 ]

Effects on PI3K signaling. Tumor cells were treated with DMSO, BEZ-235 (5uM, 1uM), BKM-120 (5uM, 1uM), RAD-001(5uM, 1uM) or cyclopamine (2.5uM, 1uM) for 3 hr. Cells were lysed and protein was analyzed for phosphorylation of AKT and S6 (pAKT and pS6) or for GAPDH by Western blotting.

Dati da [ Cancer Cell , 2012 , 21(2), 155-67 ]

The phenotype of nuclear blebbing was improved in RAD001 and rapamycin treated HGPS fibroblast cells. Cells were stained with DAPI (blue), laminA/C antibody (red), and progerin antibody (green) to show nuclear location and morphology. The treatment duration is for seven weeks. Mock: vehicle (DMSO, 0.025% v/v); Rap: 0.68 uM rapamycin, Rad: 0.1 uM RAD001. (Scale bar: 10 um)

Dati da [ Aging (Albany NY) , 2012 , 4(2), 119-32 ]

Sellecks RAD001 (Everolimus) È stato citato da 798 Pubblicazioni

Proteogenomic characterization of non-functional pancreatic neuroendocrine tumors unravels clinically relevant subgroups [ Cancer Cell, 2025, 43(4):776-796.e14] PubMed: 40185092
Ataluren improves hematopoietic and pancreatic disorders in Shwachman-Diamond syndrome patients: a compassionate program case-series [ Nat Commun, 2025, 16(1):8189] PubMed: 40897730
System analysis links SMARCD3 regulons to growth signaling and MEK inhibitor response in everolimus-resistant ER+ breast cancer cells [ Cell Rep Med, 2025, 6(11):102425] PubMed: 41260207
Haploinsufficiency of miR-143 and miR-145 reveal targetable dependencies in resistant del(5q) myelodysplastic neoplasm [ Leukemia, 2025, 39(4):917-928] PubMed: 40000845
Pancreatic Neuroendocrine Tumors Secrete Apolipoprotein E to Induce Tip Endothelial Cells That Remodel the Tumor-Stroma Ratio and Promote Cancer Progression [ Cancer Res, 2025, 85(15):2805-2819] PubMed: 40623046
Targeting the MYC oncogene with a selective bi-steric mTORC1 inhibitor elicits tumor regression in MYC-driven cancers [ Cell Chem Biol, 2025, 32(8):994-1012.e11] PubMed: 40803322
YAP1 promoter-associated noncoding RNA affects Ewing sarcoma cell tumorigenicity by regulating YAP1 expression [ Cell Mol Biol Lett, 2025, 30(1):63] PubMed: 40414844
Increased fatty acid delivery by tumor endothelium promotes metastatic outgrowth [ JCI Insight, 2025, 10(9)e187531] PubMed: 40198126
Molecular control of PDPNhi macrophage subset induction by ADAP as a host defense in sepsis [ JCI Insight, 2025, e186456] PubMed: 39903516
A phase II trial of mTORC1/2 inhibition in STK11 deficient non small cell lung cancer [ NPJ Precis Oncol, 2025, 9(1):67] PubMed: 40069402

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