Etoposide

Etoposide inibisce la sintesi del DNA formando un complesso con topoisomerase II e DNA, che induce rotture nel DNA a doppio filamento e previene la riparazione mediante il legame della topoisomerase II. Le rotture accumulate nel DNA impediscono l'ingresso nella fase mitotica della divisione cellulare e portano alla morte cellulare. Questo composto agisce principalmente nelle fasi G2 e S del ciclo cellulare. [1] Inibisce la crescita della linea cellulare di angiosarcoma murino (ISOS-1) in un periodo di 5 giorni con IC50 di 0,25 μg/mL. La crescita cellulare delle normali cellule endoteliali microvascolari murine (mECs) è meno sensibile a questa sostanza chimica con IC50 di 10 μg/mL). [2] Questo agente trattato per 6 ore inibisce le colonie della variante tetraploide della linea linfoblastica leucemica umana CCRF-CEM con IC50 di 0,6 μM. [3] Trattato per 2 ore inibisce la crescita delle linee cellulari di cancro del pancreas umano Y1, Y3, Y5, Y19, YM. YS e YT con IC50 di 300 μg/mL, 300 μg/mL, 300 μg/mL, 91 μg/mL, 0,68 μg/mL, 300 μg/mL, 300 μg/mL e 260 μg/mL, rispettivamente. [4] Questo composto esposto per 1 ora inibisce la crescita delle linee cellulari di glioma umano CL5, G142, G152, G111 e G5 con IC50 di 8, 9, 9,8, 10 e 15,8 μg/mL rispettivamente per 12 giorni. Nelle stesse condizioni, il valore IC90 si raggiunge nelle linee cellulari CL5, G152, G142 e G111 a 26, 27, 32 e 33 μg/mL. La sua inibizione della topoisomerase II è omogenea per ogni cellula. I tassi di inibizione medi sono 15%, 21,8%, 31,8%, 41,5% e 49,5% per 1, 2, 4, 8 e 16 μg di questo agente, rispettivamente. [5]

L'Etoposide somministrato come agente singolo si è dimostrato inefficace nella crescita di molti xenotrapianti, come l'epatoblastoma eterotrapiantato NMHB1 e NMHB 2, [6] lo xenotrapianto di neuroblastoma umano, [7] e lo xenotrapianto di cancro gastrointestinale umano, [8] mentre la dose di 10 mg/kg i.p. di questo composto inibisce i tumori di cellule di angiosarcoma murino ISOS-1 nel 36% dei controlli. [2] Questo agente chimico induce l'immunità tumorale nel cancro del polmone di Lewis. Una singola somministrazione di 50 mg/kg di questo agente i.p. induce una sopravvivenza del 60% dei topi C57B1/6 iniettati con cellule di cancro del polmone di Lewis (3LL) per oltre 60 giorni. Circa il 40% di questi topi sopravvissuti rifiuta una successiva sfida con 3LL, mentre nessuno dei topi di controllo sopravvive oltre 30 giorni. Le cellule 3LL che sono sopravvissute a una concentrazione letale del 90% di questo composto in vitro uccidono il 75% dei topi riceventi, ma il 60% dei topi sopravvissuti rifiuta la sfida con 3LL. Gli splenociti raccolti dai topi che rifiutano il tumore proteggono i topi ingenui iniettati con 3LL. [9]

• saggio di attività della Topoisomerase II

  Si preparano estratti nucleari e si isolano i nuclei. L'attività della topoisomerase II viene calcolata dalla percentuale di decatenazione ottenuta. Viene utilizzato come substrato DNA kinoplastico tritiato (KDNA 0,22 μg). Etoposide e topoisomerase II vengono incubati per 30 min a 37 ℃ e l'attività viene interrotta con 1% di sodio dodecil solfato (SDS) e proteinasi K (100 μg/mL). Si ottengono le percentuali di decatenazione e inibizione della topoisomerase II da parte di questo composto.

• Linee cellulari

  Human glioma cell lines CL5

• Concentrazioni

  80 μg/mL

• Tempo di incubazione

  1 hour

• Metodo

  After the Etoposide treatment, cells are removed from the dish with phosphate-buffered saline (PBS) containing 0.03% trypsin and 0.27 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) and are diluted into culture dishes in appropriate numbers to yield between 20 and 200 colonies. After 12 days, cultures are fixed with methanol-acetic acid, stained with crystal violet, and scored for colonies containing more than 50 cells. The standard errors are typically less than 15% of the mean value unless otherwise stated.

• Modelli animali

  Murine angiosarcoma xenografts ISOS-1

• Dosaggi

  10 mg/kg

• Somministrazione

  i.p. every day for 5 days from day 7