Erlotinib (CP-358774)

Erlotinib HCl inibisce potentemente l'attivazione di EGFR in cellule intatte, incluse le cellule tumorali umane della testa e del collo HNS (IC50 20nM), le cellule di cancro al colon umano DiFi e le cellule di cancro al seno umano MDA MB-468. Questo composto (1 μM) induce apoptosi nelle cellule di cancro al colon umano DiFi. [1] Inibisce la crescita di un pannello di linee cellulari NSCLC, incluse A549, H322, H3255, H358 H661, H1650, H1975, H1299, H596 con IC50 che vanno da 29 nM a >20 μM. [2] Questa sostanza chimica (2 μM) inibisce significativamente la crescita delle cellule pancreatiche AsPC-1 e BxPC-3. [3] Gli effetti di questo composto in combinazione con la gemcitabina sono considerati additivi nelle cellule di cancro pancreatico mutate KRAS. Dieci micromolari di questa sostanza chimica inibiscono la fosforilazione di EGFR nei siti Y845 (fosforilazione dipendente da Src) e Y1068 (autofosforilazione). [4] La combinazione con questo composto potrebbe modulare negativamente l'attività di Akt stimolata dalla rapamicina e produrre un effetto sinergico sull'inibizione della crescita cellulare. [5]

A dosi di 100 mg/kg, Erlotinib HCl previene completamente l'autofosforilazione di EGFR indotta da EGF nei tumori HN5 umani che crescono come xenotrapianti in topi atimici e dell'EGFR epatico dei topi trattati. [1] Questo composto (100 mg/Kg) inibisce i modelli tumorali H460a e A549 con un tasso di inibizione del 71 e 93%. [5]

• Saggi chinasici

  I pozzetti delle piastre a 96 pozzetti vengono rivestiti mediante incubazione notturna a 37 °C con 100 μL per pozzetto di 0,25 mg/mL di PGT in PBS. L'eccesso di PGT viene rimosso per aspirazione e la piastra viene lavata 3 volte con tampone di lavaggio (0,1% Tween 20 in PBS). La reazione chinasica viene eseguita in 50 μL di 50 mM HEPES (pH 7,3), contenente 125 mM di cloruro di sodio, 24 mM di cloruro di magnesio, 0,1 mM di ortovanadato di sodio, 20 μM di ATP, 1,6 μg/mL di EGF e 15 ng di EGFR, purificato per affinità da membrane cellulari A431. Erlotinib HCl in DMSO viene aggiunto per ottenere una concentrazione finale di DMSO del 2,5%. La fosforilazione viene avviata mediante l'aggiunta di ATP e prosegue per 8 minuti a temperatura ambiente, con agitazione costante. La reazione chinasica viene terminata mediante aspirazione della miscela di reazione e lavata 4 volte con tampone di lavaggio. Il PGT fosforilato viene misurato mediante 25 minuti di incubazione con 50 μL per pozzetto di anticorpo anti-fosfotirosina PY54 coniugato con HRP, diluito a 0,2 μg/mL in tampone di blocco (3% BSA e 0,05% Tween 20 in PBS). L'anticorpo viene rimosso per aspirazione e la piastra viene lavata 4 volte con tampone di lavaggio. Il segnale colorimetrico viene sviluppato mediante l'aggiunta di substrato perossidasico TMB Microwell, 50 μL per pozzetto, e interrotto mediante l'aggiunta di acido solforico 0,09 M, 50 μL per pozzetto. La fosfotirosina viene stimata mediante misurazione dell'assorbanza a 450 nm. Il segnale per i controlli è tipicamente di 0,6-1,2 unità di assorbanza, con essenzialmente nessun fondo nei pozzetti senza AlP, EGFR o PGT ed è proporzionale al tempo di incubazione per 10 minuti.

• Linee cellulari

  A549, H322, H3255, H358 H661, H1650, H1975, H1299, H596 cells

• Concentrazioni

  30 nM-20 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Exponentially growing cells are seeded in 96-well plastic plates and exposed to serial dilutions of erlotinib, pemetrexed, or the combination at a constant concentration ratio of 4:1 in triplicates for 72 h. Cell viability is assayed by cell count and the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Growth inhibition is expressed as the percentage of surviving cells in drug-treated versus PBS-treated control cells (which is considered as 100% viability). The IC50 value is the concentration resulting in 50% cell growth inhibition by a 72-h exposure to this compound compared with untreated control cells and is calculated by the CalcuSyn software.

• Modelli animali

  Male 5-week-old BALB-nu/nu mice with HPAC cells

• Dosaggi

  50 mg/kg

• Somministrazione

  Oral administration