EPZ005687

EPZ005687 mostra un'inibizione dell'attività enzimatica di PRC2 dipendente dalla concentrazione con un valore di IC50 di 54 nM. È un inibitore diretto dell'attività enzimatica di PRC2 e non agisce interrompendo le interazioni proteina-proteina tra le subunità di PRC2. Questo composto si lega nella tasca SAM del dominio SET di EZH2 ed è un inibitore SAM-competitivo dell'attività enzimatica di EZH2. L'affinità di questa sostanza chimica è simile (entro un intervallo di due volte) per i complessi PRC2 contenenti EZH2 di tipo selvaggio e mutante Tyr641, ma un'affinità significativamente maggiore per l'enzima mutante A677G (5,4 volte). Riduce la metilazione di H3K27 in varie cellule di linfoma. Mostra una robusta uccisione cellulare in cellule mutanti eterozigoti Tyr641 o Ala677, con effetti minimi sulla proliferazione delle cellule di tipo selvaggio. Questo composto aumenta la fase G1 del ciclo cellulare con diminuzioni correlative nelle fasi S e G2/M. In una linea cellulare di linfoma mutante Tyr641, può portare alla derepressione di geni bersaglio noti di EZH2 e influenzare i geni specificamente repressi dal mutante EZH2 Tyr641. [1]

EPZ005687, un inibitore selettivo della metiltransferasi EZH2, inibisce significativamente lo sviluppo della PAH indotta da TAC in modo dipendente da EZH2-SOD1-ROS.

• Saggi enzimatici biochimici

  Il composto viene incubato per 30 min con 40 μL per pozzetto di 5 nM di PRC2 (la concentrazione finale del saggio in 50 μL è di 4 nM) in tampone di saggio 1X (20 mM Bicine [pH 7.6], 0.002% Tween-20, 0.005% gelatina di pelle bovina e 0.5 mM DTT). Vengono aggiunti 10 μL per pozzetto di miscela di substrato comprendente tampone di saggio ³ H-SAM, SAM non marcato e un peptide che rappresenta i residui 21-44 dell'istone H3 contenente biotina C-terminale (aggiunta a una lisina con terminazione ammidica C-terminale) per avviare la reazione (entrambi i substrati sono presenti nella miscela di reazione finale ai rispettivi valori di Km, un formato di saggio denominato «condizioni equilibrate»). Le concentrazioni finali dei substrati e lo stato di metilazione del peptide substrato sono indicati per ciascun enzima. Le reazioni vengono incubate per 90 min a temperatura ambiente e bloccate con 10 μL per pozzetto di 600 μM di SAM non marcato, quindi trasferite su una flashplate a 384 pozzetti e lavate dopo 30 min.

• Linee cellulari

  OCI-LY19, WSU-DLCL2, Pfeiffer

• Concentrazioni

  ~10 μM

• Tempo di incubazione

  11 days

• Metodo

  Plating densities are determined for each cell line on the basis of linear log-phase growth. Cells are counted and split back to the original plating density in fresh medium with EPZ005687 on days 4 and 7.

• Modelli animali

  Balb/c mice

• Dosaggi

  10 mg/kg

• Somministrazione

  i.p.