Scheda tecnica

Descrizione biologica

Specificità	Endothelial Cell Antibody [K23P8] riconosce i livelli endogeni della proteina totale Endothelial Cell.
Contesto	Le cellule endoteliali formano un singolo, sottile monostrato che riveste le superfici interne dei vasi sanguigni e linfatici, fungendo da barriera critica tra i fluidi circolanti e i tessuti circostanti. Sono connesse da giunzioni strette e ancorate a una membrana basale, con proteine di superficie specializzate come la VE-caderina e il PECAM-1 che mantengono l'integrità vascolare e mediano le interazioni delle cellule immunitarie. Regolano il tono vascolare rilasciando vasodilatatori come l'ossido nitrico e vasocostrittori come l'endotelina, mantengono l'emostasi bilanciando fattori pro- e anticoagulanti e controllano la filtrazione dei fluidi attraverso le pareti dei vasi. Svolgono ruoli essenziali nell'Angiogenesis proliferando e migrando per formare nuovi capillari, importanti per la guarigione delle ferite, la riproduzione e la crescita tumorale. Le cellule endoteliali modulano anche la sorveglianza immunitaria attraverso l'espressione di selectine e integrine, facilitando il rolling, l'adesione e la transmigrazione dei leucociti durante l'infiammazione. La disfunzione delle cellule endoteliali contribuisce a malattie tra cui aterosclerosi, ipertensione, complicanze vascolari correlate al diabete e infiammazione cronica. Nei tumori, le cellule endoteliali anomale formano vasi irregolari e fragili privi di muscolo liscio e copertura pericitica, il che promuove la progressione e la metastasi del cancro. La disfunzione endoteliale sposta il loro fenotipo da anticoagulante e antinfiammatorio a protrombotico e proinfiammatorio, guidando la progressione delle malattie vascolari.

Specificità

Endothelial Cell Antibody [K23P8] riconosce i livelli endogeni della proteina totale Endothelial Cell.

Contesto

Le cellule endoteliali formano un singolo, sottile monostrato che riveste le superfici interne dei vasi sanguigni e linfatici, fungendo da barriera critica tra i fluidi circolanti e i tessuti circostanti. Sono connesse da giunzioni strette e ancorate a una membrana basale, con proteine di superficie specializzate come la VE-caderina e il PECAM-1 che mantengono l'integrità vascolare e mediano le interazioni delle cellule immunitarie. Regolano il tono vascolare rilasciando vasodilatatori come l'ossido nitrico e vasocostrittori come l'endotelina, mantengono l'emostasi bilanciando fattori pro- e anticoagulanti e controllano la filtrazione dei fluidi attraverso le pareti dei vasi. Svolgono ruoli essenziali nell'Angiogenesis proliferando e migrando per formare nuovi capillari, importanti per la guarigione delle ferite, la riproduzione e la crescita tumorale. Le cellule endoteliali modulano anche la sorveglianza immunitaria attraverso l'espressione di selectine e integrine, facilitando il rolling, l'adesione e la transmigrazione dei leucociti durante l'infiammazione. La disfunzione delle cellule endoteliali contribuisce a malattie tra cui aterosclerosi, ipertensione, complicanze vascolari correlate al diabete e infiammazione cronica. Nei tumori, le cellule endoteliali anomale formano vasi irregolari e fragili privi di muscolo liscio e copertura pericitica, il che promuove la progressione e la metastasi del cancro. La disfunzione endoteliale sposta il loro fenotipo da anticoagulante e antinfiammatorio a protrombotico e proinfiammatorio, guidando la progressione delle malattie vascolari.

Informazioni sullutilizzo

Applicazione

IHC

Diluizione

IHC

1:100

Reattività

Rat

Fonte

Mouse Monoclonal Antibody

MW

Tampone di conservazione

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Conservazione
(Dalla data di ricevimento)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Metodi sperimentali
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Metodi sperimentali

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12891700/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37827214/

Dati di applicazione

IHC

Validato da Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded rat brain tissue with F1713 at 1:200 dilution.