EI1

N. catalogoS7611 Lotto:S761101

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Dati tecnici

Formula

C₂₃H₂₆N₄O₂

Peso molecolare

390.48

Numero CAS

1418308-27-6

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

42 mg/mL (107.55 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	0.260mg/ml (0.67mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 5.2 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	0.260mg/ml (0.67mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 5.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

EI1 è un potente e selettivo inibitore di EZH2 con IC50 di 15 nM e 13 nM per EZH2 (WT) e EZH2 (Y641F), rispettivamente.

Target

EZH2 (Y641F) (Cell-free assay)	Ezh2 (wild-type) (Cell-free assay)
13 nM	15 nM

In vitro

Nelle cellule DLBCL, EI1 inibisce la metilazione cellulare di H3K27 e attiva l'espressione del gene bersaglio p16 di Ezh2. Nei fibroblasti embrionali di topo, questo composto inibisce anche H3K27me3 e la proliferazione cellulare. Inoltre, inibisce selettivamente la crescita delle cellule DLBCL che portano la mutazione di Ezh2 e provoca l'arresto del ciclo cellulare e l'apoptosi.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[1]}	Saggio biochimico Per la determinazione dell'IC50, EI1 viene diluito in serie di tre volte in DMSO per un totale di 12 concentrazioni, con la concentrazione iniziale di 1 μM. La reazione viene incubata a temperatura ambiente per 120 minuti e interrotta aggiungendo una soluzione di quench (2,5% di TFA con 320 nM di d4-SAH). La produzione di SAH viene quantificata utilizzando uno spettrometro di massa a quadrupolo triplo API 4000 con Turbulon Spray accoppiato a Prominence UFLC. La percentuale di inibizione viene normalizzata utilizzando controlli positivi (senza inibitore) e negativi (senza enzima), e l'IC50 viene calcolata utilizzando PRISM. Gli studi di enzimologia della competizione con la S-Adenosil metionina (SAM) vengono eseguiti con una leggera modifica delle condizioni di reazione: 10 μM di questo composto vengono utilizzati come dose iniziale per la diluizione in serie. Il SAM viene titolato in un intervallo tra 1 μM e 50 μM (corrispondente a 1 × Km e 50 × Km), e il peptide substrato è presente nella miscela di reazione finale alla sua condizione satura (10 μM). Per il profiling delle Histone Methyltransferase (HMT) nella Tabella 1, tutte le HMT sono proteine ricombinanti purificate da Escherichia coli o dal sistema Baculovirus. Il dominio catalitico di G9a, SuV39H2, Set7/9, CARM1, SETD8, NSD3, SETD2 e Dot1L, e la proteina SmyD2 a lunghezza intera sono stati utilizzati nei saggi biochimici. Le reazioni biochimiche delle HMT sono attentamente caratterizzate con studi di enzimologia e vengono determinati i Km di SAM e substrato. Le concentrazioni di SAM e substrato sono mantenute ai rispettivi Km per la maggior parte delle HMT, ad eccezione di quelle (SmyD2 e Set7/9) con un basso valore di SAM-Km, per le quali viene utilizzato 0,5 μM di SAM. Tutte le reazioni HMT vengono eseguite utilizzando lo stesso formato di saggio in cui la produzione di SAH dalla reazione biochimica viene quantificata mediante LC-MS.
Saggio cellulare:^{^[1]}	Linee cellulari Ezh2 mutant DLBCL cells (WSU-DLCL2, SU-DHL6, Karpas422, DB, and SU-DHL4), Ezh2 wild-type DLBCL cells (OCI-LY19 and GA10), and Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) Concentrazioni ~10 μM Tempo di incubazione 11-15 days Metodo Exponentially growing diffused large B-cell lymphoma (DLBCL) cells are seeded in 12-well plates at a density of 1 × 10⁵ cells/mL with the indicated concentration of EI1. Viable cell number is determined every 3–4 d for up to 14 or 15 d by Vi-CELL. Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) are seeded in a six-well plate at 2.5 × 10⁴ cell/mL and treated with this compound (3.3 μM) or 4-OH-tamoxifen (100 nM). Viable cell number is determined at days 3, 6 and 11. On days of cell counts, fresh growth medium and this chemical are replenished and cells split back to a density of 1 × 10⁵ cells/mL. Total cell number is expressed as split-adjusted viable cells per milliliter. IC50 is calculated by PRISM and all proliferation experiments are repeated more than two times and representative data are presented.

Saggio della chinasi:^{^[1]}

Saggio biochimico
Per la determinazione dell'IC50, EI1 viene diluito in serie di tre volte in DMSO per un totale di 12 concentrazioni, con la concentrazione iniziale di 1 μM. La reazione viene incubata a temperatura ambiente per 120 minuti e interrotta aggiungendo una soluzione di quench (2,5% di TFA con 320 nM di d4-SAH). La produzione di SAH viene quantificata utilizzando uno spettrometro di massa a quadrupolo triplo API 4000 con Turbulon Spray accoppiato a Prominence UFLC. La percentuale di inibizione viene normalizzata utilizzando controlli positivi (senza inibitore) e negativi (senza enzima), e l'IC50 viene calcolata utilizzando PRISM. Gli studi di enzimologia della competizione con la S-Adenosil metionina (SAM) vengono eseguiti con una leggera modifica delle condizioni di reazione: 10 μM di questo composto vengono utilizzati come dose iniziale per la diluizione in serie. Il SAM viene titolato in un intervallo tra 1 μM e 50 μM (corrispondente a 1 × Km e 50 × Km), e il peptide substrato è presente nella miscela di reazione finale alla sua condizione satura (10 μM). Per il profiling delle Histone Methyltransferase (HMT) nella Tabella 1, tutte le HMT sono proteine ricombinanti purificate da Escherichia coli o dal sistema Baculovirus. Il dominio catalitico di G9a, SuV39H2, Set7/9, CARM1, SETD8, NSD3, SETD2 e Dot1L, e la proteina SmyD2 a lunghezza intera sono stati utilizzati nei saggi biochimici. Le reazioni biochimiche delle HMT sono attentamente caratterizzate con studi di enzimologia e vengono determinati i Km di SAM e substrato. Le concentrazioni di SAM e substrato sono mantenute ai rispettivi Km per la maggior parte delle HMT, ad eccezione di quelle (SmyD2 e Set7/9) con un basso valore di SAM-Km, per le quali viene utilizzato 0,5 μM di SAM. Tutte le reazioni HMT vengono eseguite utilizzando lo stesso formato di saggio in cui la produzione di SAH dalla reazione biochimica viene quantificata mediante LC-MS.

Saggio cellulare:^{^[1]}

Linee cellulari
Ezh2 mutant DLBCL cells (WSU-DLCL2, SU-DHL6, Karpas422, DB, and SU-DHL4), Ezh2 wild-type DLBCL cells (OCI-LY19 and GA10), and Mouse embryonic fibroblasts (MEFs)
Concentrazioni
~10 μM
Tempo di incubazione
11-15 days
Metodo
Exponentially growing diffused large B-cell lymphoma (DLBCL) cells are seeded in 12-well plates at a density of 1 × 10⁵ cells/mL with the indicated concentration of EI1. Viable cell number is determined every 3–4 d for up to 14 or 15 d by Vi-CELL. Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) are seeded in a six-well plate at 2.5 × 10⁴ cell/mL and treated with this compound (3.3 μM) or 4-OH-tamoxifen (100 nM). Viable cell number is determined at days 3, 6 and 11. On days of cell counts, fresh growth medium and this chemical are replenished and cells split back to a density of 1 × 10⁵ cells/mL. Total cell number is expressed as split-adjusted viable cells per milliliter. IC50 is calculated by PRISM and all proliferation experiments are repeated more than two times and representative data are presented.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23236167/

Convalida del prodotto da parte del cliente

: , , Oncotarget, 2015, 6(32):32410-25.

: , , Mol Cancer, 2017, 16(1):5

: Dati da [ , , Oncotarget, 2015, 6(32): 32410-32425. ]

Sellecks EI1 È stato citato da 6 Pubblicazioni

Genetic and epigenetic characterization of sarcoma stem cells across subtypes identifies EZH2 as a therapeutic target [ NPJ Precis Oncol, 2025, 9(1):7]	PubMed: 39789291
Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740]	PubMed: 30135193
Epigenetic drift of H3K27me3 in aging links glycolysis to healthy longevity in Drosophila [ Elife, 2018, 7e35368]	PubMed: 29809154
Long non-coding RNA TUG1 is involved in cell growth and chemoresistance of small cell lung cancer by regulating LIMK2b via EZH2. [Niu Y, et al. Mol Cancer, 2017, 10.1186/s12943-016-0575-6]	PubMed: 28069000
The Human Immunodeficiency Virus 1 ASP RNA promotes viral latency by recruiting the Polycomb Repressor Complex 2 and promoting nucleosome assembly. [ Virology, 2017, 506:34-44]	PubMed: 28340355
NBAT1 suppresses breast cancer metastasis by regulating DKK1 via PRC2 [Hu P, et al. Oncotarget, 2015, 6(32):32410-25]	PubMed: 26378045

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