GSK1349572 (Dolutegravir)

Dolutegravir (GSK1349572) mostra un potente effetto inibitorio su nove isolati clinici di pazienti infetti da HIV-2 naïve agli inibitori dell'integrasi con EC50 compresa tra 0,2 nM e 1,4 nM.[1]

In vitro, inibisce il trasferimento del filamento catalizzato dall'integrasi ricombinante dell'HIV-1 con un IC50 di 2,7 nM. Inoltre, questo composto inibisce potentemente la replicazione dell'HIV in cellule come le cellule mononucleari del sangue periferico (PBMC), le cellule MT-4 e le cellule CIP4 infettate con un vettore lentivirale PHIV auto-inattivante, con valori di EC50 rispettivamente di 0,51 nM, 0,71 nM e 2,2 nM.[2]

In vitro, mostra anche una potente attività contro cinque diversi virus resistenti agli inibitori della trascrittasi inversa non nucleosidici o agli inibitori della trascrittasi inversa nucleosidici, con EC50 compresa tra 1,3 nM e 2,1 nM. Similmente alla sua attività contro il virus di tipo selvatico, mostra un'efficacia equivalente contro due virus resistenti agli inibitori della proteasi, con valori di EC50 rispettivamente di 0,36 nM e 0,37 nM.[2]

Il Dolutegravir (GSK1349572), un farmaco antiretrovirale (ARV) di prima linea utilizzato nella terapia combinata per l'HIV-1, inibisce l'attività delle MMP e ha il potenziale di influenzare il neurosviluppo prenatale e postnatale.

• Saggio di trasferimento del filamento in vitro

  Le potenze inibitorie di Dolutegravir (GSK1349572) e di altri INI sono misurate in un saggio di trasferimento del filamento utilizzando l'integrasi ricombinante dell'HIV. Un complesso di integrasi e microsfere di saggio di prossimità a scintillazione (SPA) rivestite di streptavidina-DNA donatore pre-processato biotinilato viene formato incubando 2 μM di integrasi ricombinante purificata con 0,66 μM di microsfere SPA rivestite di streptavidina-DNA donatore biotinilato da 4 mg/mL in 25 mM di acido morfolinopropanosolfonico di sodio (MOPS) (pH 7,2), 23 mM di NaCl e 10 mM di MgCl₂ per 5 minuti a 37 °C. Queste microsfere vengono centrifugate e preincubate con INI diluiti per 60 minuti a 37 °C. Quindi viene aggiunto un substrato di DNA target marcato con ₃H per ottenere una concentrazione finale di 7 nM di substrato, e la miscela di reazione di trasferimento del filamento viene incubata a 37 °C per 25-45 minuti, il che consente un aumento lineare del trasferimento del filamento del DNA donatore al DNA target radiomarcato. Il segnale viene letto utilizzando un lettore di piastre a scintillazione Wallac MicroBeta.

• Linee cellulari

  MT-4

• Concentrazioni

  0 to 10 μM

• Tempo di incubazione

  4 days or 5 days

• Metodo

  Exponentially growing MT-4 cells at a density of 500,000 or 600,000/mL are infected with HIV-1 strain IIIB at a viral multiplicity of infection of 0.001 or a 50% tissue culture infective dose of 4 to 10. The cells are then aliquoted to 96-well plates in the presence of varying concentrations of Dolutegravir (GSK1349572). After incubation for 4 or 5 days, antiviral activity is determined by a cell viability assay that either measured bioluminescence with a CellTiter-Glo luminescent reagent or measured absorbance at 560 and 690 nm using the yellow tetrazolium MTT reagent [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide].

• Modelli animali

  C3H/HeJ mice

• Dosaggi

  50 mg/kg

• Somministrazione

  o.g.