Dinaciclib (SCH 727965)

Dinaciclib è anche un potente inibitore della replicazione del DNA che blocca l'incorporazione del DNA di timidina (dThd) nelle cellule A2780 con una IC50 di 4 nM. Questo composto sopprime fortemente la fosforilazione di Rb su Ser 807/811 a concentrazioni >6,25 nM, il che è in accordo con l'osservazione che sono necessarie concentrazioni di 4 nM per il 50% di inibizione dell'incorporazione del DNA di dThd nello stesso modello cellulare. Significativamente, la soppressione completa della fosforilazione di Rb è correlata all'insorgenza dell'apoptosi, come indicato dalla comparsa del prodotto di scissione PARP p85 nelle cellule esposte a >6,25 nM di questa sostanza chimica. È attivo contro un ampio spettro di linee cellulari tumorali umane. [1] L'aggiunta di questo composto durante l'esposizione sopprime anche l'accumulo di γ-H2AX, in modo dose-dipendente. [2] Inibisce la proliferazione delle cellule di melanoma e le spinge verso un'apoptosi massiva. [3] Questa sostanza chimica induce l'apoptosi di diverse linee cellulari di osteosarcoma, comprese quelle resistenti alla doxorubicina. Attenua la fosforilazione di RNAP II sulla serina 2 e la fosforilazione dell'inibitore di CDK p27^Kip1 sulla treonina 187. Le riduzioni dell'attività di fosforilazione si verificano a 12 - 40 nM di questo composto (4-16 ore dopo l'aggiunta). Riduce anche la fosforilazione di Rb sulla serina 807/811. Questa sostanza chimica induce l'apoptosi delle cellule U2OS private di mock e p53 in misura simile. [4]

La somministrazione i.p. di Dinaciclib a 8, 16, 32 e 48 mg/kg al giorno per 10 giorni comporta un'inibizione tumorale rispettivamente del 70%, 70%, 89% e 96%. La MED (dose efficace minima) di questo composto sembra essere <8 mg/kg. È ben tollerato e la massima perdita di peso corporeo nel gruppo a dose più alta è del 5%. Questa sostanza chimica ha un'attività antitumorale dose-dipendente in vivo e un'inibizione quasi completa della crescita tumorale si verifica a un livello di dose inferiore alla MTD (dose massima tollerata). Ha una breve emivita plasmatica nel topo. [1]

• Saggio chinasi Ciclina/CDK

  Le oloenzimi ciclina/CDK ricombinanti vengono purificate da cellule Sf9 ingegnerizzate per produrre baculovirus che esprimono una ciclina o una CDK specifica. I complessi ciclina/CDK vengono tipicamente diluiti a una concentrazione finale di 50 μg/mL in un tampone di reazione chinasica contenente 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT e 0,1 mM ortovanadato di sodio. Per ogni reazione chinasica, 1 μg di enzima e 20 μL di una soluzione di substrato 2 μM (un peptide biotinilato derivato dall'istone H1) vengono miscelati e combinati con 10 μL di questo composto diluito. La reazione viene avviata con l'aggiunta di 50 μL di ATP 2 μM e 0,1 μCi di ³³P-ATP. Le reazioni chinasiche vengono incubate per 1 ora a temperatura ambiente e vengono interrotte con l'aggiunta di 0,1% di Triton X-100, 1 mM di ATP, 5 mM di EDTA e 5 mg/mL di perline SPA rivestite di streptavidina. Le perline SPA vengono catturate utilizzando una piastra filtrante GF/B a 96 pozzetti e un raccoglitore universale Filtermate. Le perline vengono lavate due volte con NaCl 2 M e due volte con NaCl 2 M contenente 1% di acido fosforico. Il segnale viene quindi analizzato utilizzando un contatore a scintillazione liquida TopCount a 96 pozzetti.

• Linee cellulari

  A2780 cells

• Concentrazioni

  0 μM -5 μM

• Tempo di incubazione

  24 hours

• Metodo

  A2780 cells are maintained in DMEM plus 10% fetal bovine serum and passaged twice weekly by detaching the monolayer with trypsin-EDTA. One hundred microliters of A2780 cells (5 × 10³ cells) are added per well to a 96-well Cytostar-T plate and incubated for 16 hours to 24 hours at 37 °C. Dinaciclib is serially diluted in complete media plus 2% ¹⁴C-labeled dThd. Media are removed from the Cytostar T plate; 200 μL of various this compound dilutions are added in quadruplicate; and the cells are incubated for 24 hours at 37 °C. Accumulated incorporation of radiolabel is assayed using scintillation proximity and measured on a TopCoun^TM.

• Modelli animali

  Nude mice bearing A2780 tumors

• Dosaggi

  8 mg/kg, 16 mg/kg, 32 mg/kg, and 48 mg/kg

• Somministrazione

  Administered via i.p.