Dihydroethidium

Dihydroethidium (DHE, HE, Hydroethidine, PD-MY 003) è una sonda fluorogenica blu permeabile alle cellule utilizzata per rilevare l'anione radicale superossido intracellulare.

1.1 Preparazione della soluzione stock
Sciogliere 1 mg di Dihydroethidium in 0,31 mL di DMSO per ottenere 10 mM di questo composto.
Nota: Si raccomanda di conservare la soluzione stock a -20°C o -80°C al riparo dalla luce ed evitare cicli ripetitivi di congelamento-scongelamento.
1.2 Preparazione della soluzione di lavoro di questa sostanza chimica
Diluire la soluzione stock in terreno di coltura cellulare privo di siero o PBS per ottenere una soluzione di lavoro di 1-10 μM di questo composto.
Nota: Si prega di regolare la concentrazione della soluzione di lavoro di questa sostanza chimica in base alla situazione reale.
Colorazione cellulare
2.1 Per le cellule in sospensione: Centrifugare a 1000 g a 4°C per 3-5 minuti e quindi scartare il surnatante. Lavare due volte con PBS, 5 minuti ogni volta.
Per le cellule aderenti: Scartare il terreno di coltura cellulare e aggiungere tripsina per dissociare le cellule e creare una sospensione unicellulare. Centrifugare a 1000 g a 4°C per 3-5 minuti e quindi scartare il surnatante. Lavare due volte con PBS, 5 minuti ogni volta.
2.2 Aggiungere 1 mL della soluzione di lavoro di questo composto, quindi incubare a temperatura ambiente per 30 minuti.
2.3 Centrifugare a 400 g a 4°C per 3-4 minuti e quindi scartare il surnatante.
2.4 Lavare due volte con PBS, 5 minuti ogni volta.
2.5 Risospendere le cellule con terreno di coltura cellulare privo di siero o PBS, quindi rilevare con un microscopio a fluorescenza o un citometro a flusso.