Derazantinib

ARQ-087 ha attività antiproliferativa in linee cellulari guidate da disregolazione di FGFR, incluse amplificazioni, fusioni e mutazioni. Studi sul ciclo cellulare in linee cellulari con alti livelli di proteina FGFR2 mostrano una relazione positiva tra l'arresto del ciclo cellulare in fase G1 indotto da ARQ 087 e la successiva induzione dell'apoptosi. ARQ 087 inibisce l'autofosforilazione di FGFR1 e FGFR2 in modo dose-dipendente. Nelle cellule Cos-1 che sovraesprimono FGFR1, FGFR2, FGFR3 e FGFR4 a lunghezza intera, ARQ 087 inibisce la loro fosforilazione con valori di EC50 di < 0,123 μM, 0,185 μM, 0,463 μM, >10 μM rispettivamente. ARQ 087 inibisce la chinasi FGFR tramite un meccanismo competitivo per l'ATP ed è in grado di inibire sia le forme inattive che quelle completamente attive della chinasi FGFR. Quindi, ARQ 087 ritarda l'attivazione di FGFR inibendo la sua autofosforilazione, nonché l'inibizione della chinasi attiva fosforilata[1].

ARQ 087 attenua la segnalazione di FGFR nei tumori di xenotrapianto umano SNU-16, portando a una riduzione di phospho-FGFR, phospho-FRS2-α e phospho-ERK, mentre la proteina FGFR2 totale non è influenzata. ARQ 087 è efficace nell'inibire la crescita tumorale in vivo in modelli di tumori di xenotrapianto SNU-16 e NCI-H716 alterati da FGFR2 con amplificazioni e fusioni geniche. ARQ 087 ha dimostrato efficacia in diversi modelli di xenotrapianto in vivo ed è stato ben tollerato a dosi fino a 75 mg/kg[1].

• Determinazione di Ki e modalità di inibizione

  L'attività inibitoria della chinasi di ARQ 087 è stata determinata per le proteine ricombinanti FGFR1 o FGFR2 utilizzando un substrato peptidico PYK2 biotinilato e ATP. ARQ 087 è stato titolato in DMSO utilizzando uno schema di diluizione 3 volte, e quindi diluito ulteriormente 10 volte in acqua deionizzata per una concentrazione finale di DMSO del 10%. Un volume (2,5 μL) di queste diluizioni o del veicolo è stato aggiunto a ciascun pozzetto di una piastra di reazione. FGFR1 o FGFR2 è stato aggiunto al tampone di saggio (50 mM Tris, pH 8,0, 0,02 mg/mL BSA, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 10% glicerolo, 0,1 mM Na3PO4, 1 mM DTT) a ciascun pozzetto in un volume di 17,5 μL per una concentrazione finale di 0,50 o 0,25 nM, rispettivamente. Dopo un periodo di pre-incubazione di 30 minuti, ATP e substrato sono stati aggiunti in tampone di saggio (5 μL) per concentrazioni finali di 0–1.000 μM ATP e 80 nM PYK2 biotinilato, per un volume di reazione finale di 25 μL. Le piastre sono state incubate per 60 minuti a temperatura ambiente, e quindi bloccate al buio mediante l'aggiunta di 10 μL di miscela di blocco/rilevazione preparata in tampone di saggio contenente EDTA, AlphaScreen™ Streptavidin Donor e P-TYR-100 Acceptor beads per concentrazioni finali di 10 mM EDTA e 500 ng/pozzetto di entrambe le beads AlphaScreen™ Donor e Acceptor. Le piastre di saggio sono state incubate per 60 minuti a temperatura ambiente al buio, e le piastre sono state lette su un lettore di piastre multi-etichetta Perkin Elmer, Envision (lunghezza d'onda di eccitazione: 640 nm, lunghezza d'onda di emissione: 570 nm). L'effetto della concentrazione enzimatica è stato applicato per gli inibitori a legame forte, e se necessario, i valori di IC50 sono stati convertiti in valori di Ki se la concentrazione enzimatica era superiore ai valori di IC50 nelle condizioni di saggio utilizzate.

• Linee cellulari

  NCI-H716 and SNU-16 cells

• Concentrazioni

  0.1 μM or 1 μM

• Tempo di incubazione

  24 or 72 hours

• Metodo

  Cells are plated and incubated at 37°C overnight and subsequently treated with 0.1 μM or 1 μM of ARQ 087 for 24 or 72 hours. The cells were fixed and stained with Cycletest Plus Reagent kit and cell cycle profiles were analyzed using a FACS Calibur flow cytometer.

• Modelli animali

  female NCr nu/nu mice (SNU-16) or CB17 SCID mice (NCI-H716)

• Dosaggi

  0, 25, 50, and 75 mg/kg

• Somministrazione

  oral administration