In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
Decernotinib (VX-509) è un inibitore potente e selettivo di JAK3 con un Ki di 2,5 nM, che dimostra una selettività >4 volte superiore rispetto a JAK1, JAK2 e TYK2, rispettivamente. Attualmente è in Fase 2/3.
Target
JAK3
JAK1
JAK1
JAK2
TYK2
2.5 nM(Ki)
11 nM
11 nM(Ki)
13 nM(Ki)
13 nM(Ki)
In vitro
Nelle cellule HT-2, Decernotinib (VX-509) inibisce la fosforilazione di STAT-5 di HT-2 stimolata da IL-2, la proliferazione dei blasti di cellule T umane e la proliferazione delle cellule B indotta da CD40L/IL-4.
In vivo
In un modello di ratto di artrite indotta da collagene, S7541 (50 mg/kg, p.o.) determina una riduzione dose-dipendente del gonfiore della caviglia e del peso della zampa e un miglioramento dei punteggi istopatologici della zampa. In un modello di topo di ipersensibilità di tipo ritardato indotta da ossazolone, S7541 (50 mg/kg, p.o.) sopprime significativamente l'edema dell'orecchio. In un modello di ratto HvG, S7541 (50 mg/kg, p.o.) determina un'inibizione dose-dipendente dell'iperplasia dei linfonodi poplitei (PLN).
L'effetto di Decernotinib (VX-509) sull'attività di JAK3 viene valutato misurando l'attività chinasica residua del dominio chinasico di JAK3 espresso in modo ricombinante utilizzando un saggio radiometrico. Le concentrazioni finali dei componenti nel saggio sono le seguenti: 100 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 1 mM ditiotreitolo (DTT), 0,01% BSA, 0,25 nM JAK3, 0,25 mg/ml polyE4Y e 5 μM 33P-γ-ATP (200 µCi/µmol). Una soluzione madre a 10 mM di questo composto viene preparata in DMSO, da cui vengono preparate ulteriori diluizioni. Viene aggiunta e miscelata una miscela di substrati (100 mM HEPES, 10 mM MgCl2, 0,5 mg/ml polyE4Y e 10 μM 33P-γ-ATP). La reazione viene avviata con l'aggiunta di una miscela enzimatica [100 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 2 mM DTT, 0,02% BSA, 0,5 nM JAK3]. Dopo 15 minuti, la reazione è stata bloccata con acido tricloroacetico (TCA) al 20%. La reazione bloccata è stata trasferita su piastre filtranti GF/B e lavata tre volte con TCA al 5%. Dopo l'aggiunta di scintillante Ultimate Gold (50 μl), i campioni sono stati contati in un contatore gamma Packard TopCount (PerkinElmer). In questa procedura, la radioattività intrappolata è una misura dell'attività chinasica residua di JAK3. Dalla curva di titolazione attività versus concentrazione di VX-509, il valore di Ki è stato determinato adattando i dati a un'equazione per la cinetica di inibizione competitiva a legame stretto utilizzando il software Prism.
Frozen purified human B cells are thawed, washed, and resuspended in complete medium. Cells are plated onto a 96-well plate at a density of 2 × 105 cells/well. Decernotinib (VX-509) is added, and plates are incubated for 30 minutes at 37°C, followed by stimulation with a combination of 10 ng/ml IL-4 and 1 μg/ml CD40L. DMSO alone is added to the top two rows, one of which is stimulated with IL-4 or CD40L (negative control) and the other of which served as a proliferation control. The plates are incubated at 37°C for 6 days. On day 6, cells are pulsed with [3H]thymidine for 7 hours and harvested onto filters for radioactive determination using a PerkinElmer-Wallace beta counter (1205 Betaplate Beta Liquid Scintillation Counter). Data are analyzed with Softmax pro software to generate an IC50 value.
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