D 4476

N. catalogoS7642 Lotto:S764201

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Dati tecnici

Formula

C₂₃H₁₈N₄O₃

Peso molecolare

398.41

Numero CAS

301836-43-1

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

79 mg/mL (198.28 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

D 4476 è un potente, selettivo e permeabile alle cellule inibitore di CK1 (casein kinase 1) con IC50 di 200 nM e 300 nM in un saggio senza cellule per CK1 da Schizosaccharomyces pombe e CK1δ, rispettivamente. Agisce anche come inibitore di ALK5 con IC50 di 500 nM.

Target

CK1 from Schizosaccharomyces pombe	CK1δ	ALK5
200 nM	300 nM	500 nM

In vitro

D4476 (10 μM) inibisce efficacemente CK1 e ALK5 con attività di circa il 7% e il 22% rispetto al gruppo di controllo, rispettivamente. Nelle cellule di epatoma H4IIE, D4476 inibisce specificamente la fosforilazione del fattore di trascrizione endogeno forkhead box O1a (FOXO1a) su Ser322 e Ser325, senza influenzare la fosforilazione di altri siti. D4476 induce citotossicità nelle linee ANBL6, INA6 e RPMI8226; le linee MM1S e U266 sono meno sensibili; e la linea OPM1 è totalmente resistente. Alte concentrazioni (50 μM) di D4476 hanno indotto tossicità in tutte le linee di mieloma multiplo (MM). Nelle cellule MM, D4476 aumenta i livelli proteici di TP53, P27 e FADD, così come la progressione del ciclo cellulare e l'induzione dell'apoptosi. Il trattamento delle cellule staminali leucemiche (LSC) con D4476 mostra un'uccisione altamente selettiva delle LSC rispetto alle normali HSPC.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[4]}	CK1 kinase assay Tutti i saggi di proteina chinasi (25 μL) vengono eseguiti a temperatura ambiente (21℃). I saggi vengono eseguiti per 40 minuti utilizzando una Workstation di automazione di laboratorio Biomek 2000 in un formato a 96 pozzetti. Le concentrazioni di acetato di magnesio e [γ-^33P]ATP (800 cpm/pmol) nei saggi sono rispettivamente 10 mM e 0,1 mM. I saggi vengono iniziati con MgATP e interrotti con l'aggiunta di 5 μL di acido ortofosforico 0,5 M. Aliquote vengono quindi macchiate su filtri P30, lavate quattro volte in acido fosforico 75 mM per rimuovere l'ATP, una volta in metanolo, quindi essiccate e contate per la radioattività. CK1 δ (5-20 m-unità), diluito in 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EGTA, 0,1% (v/v) Triton X-100, 5 mM ditiotreitolo, 50% (v/v) glicerolo, viene saggiato contro il peptide RRKDLHDDEEDEAMSITA in un'incubazione contenente 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,1% (v/v) Triton X-100 e 0,5 mM di peptide substrato.
Saggio cellulare:^{^[2]}	Linee cellulari MM cell lines including MM1S, RPMI8226, U266, MM1R, OPM1, OPM2, INA6, ANBL6, ANBL-6VR, LR5 and RPMI-DOX40 (DOX40) cells Concentrazioni 50 μM Tempo di incubazione 72 h Metodo MM cells are seeded in triplicate into 96-well plates in 100 μL culture media. D4476 is added to each well at concentrations of 0, 5, 10, 20, 30, 40, and 50 μM in another 100 μL culture media. Cell viability is measured with MTT at the 72 h drug exposure. Absorbance is measured at 570 nm with spectrophotometer.

Saggio della chinasi:^{^[4]}

CK1 kinase assay
Tutti i saggi di proteina chinasi (25 μL) vengono eseguiti a temperatura ambiente (21℃). I saggi vengono eseguiti per 40 minuti utilizzando una Workstation di automazione di laboratorio Biomek 2000 in un formato a 96 pozzetti. Le concentrazioni di acetato di magnesio e [γ-^33P]ATP (800 cpm/pmol) nei saggi sono rispettivamente 10 mM e 0,1 mM. I saggi vengono iniziati con MgATP e interrotti con l'aggiunta di 5 μL di acido ortofosforico 0,5 M. Aliquote vengono quindi macchiate su filtri P30, lavate quattro volte in acido fosforico 75 mM per rimuovere l'ATP, una volta in metanolo, quindi essiccate e contate per la radioattività. CK1 δ (5-20 m-unità), diluito in 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EGTA, 0,1% (v/v) Triton X-100, 5 mM ditiotreitolo, 50% (v/v) glicerolo, viene saggiato contro il peptide RRKDLHDDEEDEAMSITA in un'incubazione contenente 20 mM Hepes, pH 7,5, 0,15 M NaCl, 0,1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,1% (v/v) Triton X-100 e 0,5 mM di peptide substrato.

Saggio cellulare:^{^[2]}

Linee cellulari
MM cell lines including MM1S, RPMI8226, U266, MM1R, OPM1, OPM2, INA6, ANBL6, ANBL-6VR, LR5 and RPMI-DOX40 (DOX40) cells
Concentrazioni
50 μM
Tempo di incubazione
72 h
Metodo
MM cells are seeded in triplicate into 96-well plates in 100 μL culture media. D4476 is added to each well at concentrations of 0, 5, 10, 20, 30, 40, and 50 μM in another 100 μL culture media. Cell viability is measured with MTT at the 72 h drug exposure. Absorbance is measured at 570 nm with spectrophotometer.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14710188/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24962017/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24616378/

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12534346/

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Convalida del prodotto da parte del cliente

: Dati da [ , , Mol Oncol, 2016, 10(5):677-92 ]

Sellecks D 4476 È stato citato da 22 Pubblicazioni

SCFβ-TrCP targets Ajuba for degradation in a GSK3β-dependent manner in colorectal cancer [ Neoplasia, 2025, 66:101175]	PubMed: 40367710
A kinome-wide CRISPR screen identifies CK1α as a target to overcome enzalutamide resistance of prostate cancer [ Cell Rep Med, 2023, 4(4):101015]	PubMed: 37075701
Golgi retention and oncogenic KIT signaling via PLCγ2-PKD2-PI4KIIIβ activation in gastrointestinal stromal tumor cells [ Cell Rep, 2023, 42(9):113035]	PubMed: 37616163
Neddylation inhibition induces glutamine uptake and metabolism by targeting CRL3SPOP E3 ligase in cancer cells [ Nat Commun, 2022, 13(1):3034]	PubMed: 35641493
CHMP2B regulates TDP-43 phosphorylation and cytotoxicity independent of autophagy via CK1 [ J Cell Biol, 2022, 221(1)e202103033]	PubMed: 34726688
CK1α upregulates the IFNAR1 expression to prompt the anti-HBV effect of type I IFN in hepatoma carcinoma cells [ Virol Sin, 2022, S1995-820X(22)00143-2]	PubMed: 35985475
SPOP and OTUD7A Control EWS-FLI1 Protein Stability to Govern Ewing Sarcoma Growth [ Adv Sci (Weinh), 2021, e2004846]	PubMed: 34060252
SPOPandOTUD7AControlEWS–FLI1Protein Stability to Govern Ewing Sarcoma Growth [ ADVANCED SCIENCE, 2021, 8(14)]	PubMed: None
CK1δ stimulates ubiquitination-dependent proteasomal degradation of ATF4 to promote chemoresistance in gastric Cancer [ Clin Transl Med, 2021, 11(10):e587]	PubMed: 34709767
SKI activates the Hippo pathway via LIMD1 to inhibit cardiac fibroblast activation [ Basic Res Cardiol, 2021, 116(1):25]	PubMed: 33847835

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