Cytarabine

La Cytarabine (AraC) viene fosforilata in una forma trifosfato (Ara-CTP) coinvolgendo la deossicitidina chinasi (dCK), che compete con il dCTP per l'incorporazione nel DNA, e quindi blocca la sintesi del DNA inibendo la funzione delle DNA e RNA polimerasi. Questo composto mostra una maggiore attività inibitoria della crescita verso le cellule CCRF-CEM di tipo selvaggio rispetto ad altre cellule di leucemia mieloide acuta (AML) con IC50 di 16 nM. [1] L'aumento delle concentrazioni di questa sostanza chimica (IC50 di 0,69 μM) porta a una diminuzione dell'attività metabolica della linea cellulare leucemica di ratto sensibile RO/1, e la tossicità cellulare può essere notevolmente aumentata dalla trasfezione con dCK umana wt (IC50 di 0,037 μM) ma non dalle forme dCK inattive, a splicing alternativo. [2] Apparentemente induce l'apoptosi dei neuroni simpatici di ratto a 10 μM, di cui 100 μM mostrano la massima tossicità e uccidono oltre l'80% dei neuroni entro 84 ore, coinvolgendo il rilascio del citocromo-c mitocondriale e l'attivazione della caspasi-3, e la tossicità può essere attenuata dall'abbattimento di p53 e ritardata dalla delezione di bax. [3]

La Cytarabine è altamente efficace contro le leucemie acute, che causa il caratteristico blocco e sincronizzazione G1/S, e aumenta il tempo di sopravvivenza per i ratti Brown Norway leucemici in modo debolmente correlato alla dose, indicando che l'uso di dosaggi più elevati di questo composto non contribuisce alla sua efficacia antileucemica nell'uomo. [4] Questa sostanza chimica causa anche il ritardo della crescita placentare e aumenta l'apoptosi delle cellule trofoblastiche placentari nella zona del labirinto placentare delle ratte gravide Slc:Wistar, che aumenta 3 ore dopo il trattamento e raggiunge il picco a 6 ore prima di tornare ai livelli di controllo a 48 ore, con proteina p53, geni bersaglio trascrizionali di p53 come p21, ciclina G1 e fas e attività della caspasi-3 notevolmente migliorate. [5]

• Saggio di inibizione della crescita in vitro

  La soluzione madre di Cytarabine è preparata in etanolo assoluto, e vengono preparate diluizioni seriali di questo composto. Le cellule CCRF-CEM vengono sospese in terreno RPMI supplementato con 10% di FBS, 0,1% di gentamicina e 1% di piruvato di sodio. Le cellule vengono sospese nei rispettivi terreni per ottenere volumi di 10 mL di sospensione cellulare ad una densità finale di 3-6 × 10⁴ cellule/mL. Volumi appropriati di questa soluzione chimica vengono trasferiti alle sospensioni cellulari, e l'incubazione viene continuata per 72 ore. Le cellule vengono centrifugate e risospese in terreno fresco privo di questo composto, e vengono determinati i conteggi cellulari finali. I dati vengono analizzati mediante adattamento di curva sigmoidea del conteggio cellulare versus la concentrazione di questo prodotto chimico, e i risultati sono espressi come IC50 (concentrazione di questo composto che inibisce la crescita cellulare al 50% del valore di controllo).

• Linee cellulari

  Rat leukemic cell lines RCL/0, RO/1 and K7 and human myelomonocytic leukemic U937

• Concentrazioni

  ~100 μM

• Tempo di incubazione

  24, 48 and 72 hours

• Metodo

  Cells are incubated in the presence of different concentrations of Cytarabine at 37 °C for 24, 48, and 72 hours. At the time of 20-, 44-, or 68-hour incubation in the presence of this compound, 10 mL of cell proliferation reagent WST-1 solution is added. After 2- and 4-hour incubation with WST-1, cell metabolic activity is assessed with colorimetric changes quantified by measuring the absorbance in a spectrophotometer at 450 nm. And cell division times are calculated from eosin counting in parallel with viability assay

• Modelli animali

  Brown Norway rat with myelocytic leukaemia

• Dosaggi

  5 - 1000 mg/kg

• Somministrazione

  Injection i.v.