CW069

N. catalogoS7336 Lotto:S733601

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Dati tecnici

Formula

C₂₃H₂₁IN₂O₃

Peso molecolare

500.33

Numero CAS

1594094-64-0

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (199.86 mM)

Ethanol

4 mg/mL (7.99 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	5.000mg/ml (9.99mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	1.000mg/ml (2.00mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 20 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

CW069 è un inibitore allosterico e selettivo della proteina motrice dei microtubuli HSET con IC50 di 75 μM, con significativa selettività rispetto a KSP.

Target

HSET

75 μM

In vitro

CW069 aumenta i fusi multipolari nelle cellule N1E-115 con centrosomi supernumerari senza alterare la morfologia del fuso bipolare nelle normali cellule di fibroblasti dermici umani. Questo composto inibisce la crescita nelle cellule tumorali N1E-115 con IC50 di 10 μM, ma non nelle cellule NHDF o nelle cellule primarie del midollo osseo umano.

Caratteristiche

Inibitore allosterico selettivo per HSET.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[1]}	Saggio enzimatico ATPasi In Vitro Il protocollo è ottimizzato per l'uso con HSET e KSP a lunghezza intera, N-terminale, con tag 6His, e ha misurato l'attività stimolata da MT delle proteine. L'inibizione dell'attività Gsp sintetasi di HSET/KSP è osservata spettrofotometricamente accoppiando l'idrolisi dell'ATP all'ossidazione del NADH tramite reazioni di piruvato chinasi/lattato deidrogenasi. Il saggio viene avviato aggiungendo Gsp sintetasi/amidasi purificata (12,8 nM) a una miscela di saggio contenente i seguenti componenti (concentrazione finale): 6 nM di proteina, 0,07 mg/ml di MT (University Biologicals), 1,56 mM di glutatione, 10 mM di spermidina, 2 mM di ATP, 2,7 mM di MgCl₂, 1 mM di fosfo(enol)-piruvato, 0,2 mM di NADH, 50 μg/ml di lattato deidrogenasi, 100 μg/ml di piruvato chinasi e varie concentrazioni di questo composto, il tutto in 50 mM di Na PIPES (pH 6,8) a 37 °C. Il saggio di rilevamento ADP-Glo (Promega) viene eseguito come descritto nelle istruzioni del produttore. Tutte le aggiunte di composti sono state eseguite utilizzando un multidrop BioMek Nxp. Le piastre sono state lette utilizzando un lettore di micropiastre Pherastar.
Saggio cellulare:^{^[1]}	Linee cellulari N1E-115 cells, NHDF and primary human bone marrow cells. Concentrazioni ~400 μM Tempo di incubazione 72 hours Metodo Cells are cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at 37°C and 5% CO2. All compounds used in the Sulforhodamine B colorimetric (SRB) assay are dissolved in DMSO and diluted in culture medium to a final concentration of 0.2% DMSO. For the SRB assay and live-cell imaging, cells are seeded in 96-well plates at a density of 2,500 cells per well. After 24 hr, the cells are treated with this compound for 72 hr, with triplicate wells for each concentration. For the SRB assay, the cells are then fixed with trichloroacetic acid (TCA) and stained with SRB. Fluorescence is quantified using an Infinite 200 PRO plate-reader at a wavelength of 545 nm. Compound-treated wells are compared with solvent control wells and the concentration of this chemical that results in 50% of the solvent-control cell growth is designated as the IC50 concentration, calculated using Graphpad PRISM 6. At least three biological replicates are performed for each assay.

Saggio della chinasi:^{^[1]}

Saggio enzimatico ATPasi In Vitro
Il protocollo è ottimizzato per l'uso con HSET e KSP a lunghezza intera, N-terminale, con tag 6His, e ha misurato l'attività stimolata da MT delle proteine. L'inibizione dell'attività Gsp sintetasi di HSET/KSP è osservata spettrofotometricamente accoppiando l'idrolisi dell'ATP all'ossidazione del NADH tramite reazioni di piruvato chinasi/lattato deidrogenasi. Il saggio viene avviato aggiungendo Gsp sintetasi/amidasi purificata (12,8 nM) a una miscela di saggio contenente i seguenti componenti (concentrazione finale): 6 nM di proteina, 0,07 mg/ml di MT (University Biologicals), 1,56 mM di glutatione, 10 mM di spermidina, 2 mM di ATP, 2,7 mM di MgCl₂, 1 mM di fosfo(enol)-piruvato, 0,2 mM di NADH, 50 μg/ml di lattato deidrogenasi, 100 μg/ml di piruvato chinasi e varie concentrazioni di questo composto, il tutto in 50 mM di Na PIPES (pH 6,8) a 37 °C. Il saggio di rilevamento ADP-Glo (Promega) viene eseguito come descritto nelle istruzioni del produttore. Tutte le aggiunte di composti sono state eseguite utilizzando un multidrop BioMek Nxp. Le piastre sono state lette utilizzando un lettore di micropiastre Pherastar.

Saggio cellulare:^{^[1]}

Linee cellulari
N1E-115 cells, NHDF and primary human bone marrow cells.
Concentrazioni
~400 μM
Tempo di incubazione
72 hours
Metodo
Cells are cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at 37°C and 5% CO2. All compounds used in the Sulforhodamine B colorimetric (SRB) assay are dissolved in DMSO and diluted in culture medium to a final concentration of 0.2% DMSO. For the SRB assay and live-cell imaging, cells are seeded in 96-well plates at a density of 2,500 cells per well. After 24 hr, the cells are treated with this compound for 72 hr, with triplicate wells for each concentration. For the SRB assay, the cells are then fixed with trichloroacetic acid (TCA) and stained with SRB. Fluorescence is quantified using an Infinite 200 PRO plate-reader at a wavelength of 545 nm. Compound-treated wells are compared with solvent control wells and the concentration of this chemical that results in 50% of the solvent-control cell growth is designated as the IC50 concentration, calculated using Graphpad PRISM 6. At least three biological replicates are performed for each assay.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24210220/

Convalida del prodotto da parte del cliente

: Dati da [ , , J Cell Sci, 2017, 130(21):3676-3684 ]

Sellecks CW069 È stato citato da 8 Pubblicazioni

Two cancer cell lines utilize Myosin 10 and the kinesin HSET differentially to maintain mitotic spindle bipolarity [ PLoS One, 2025, 20(5):e0325016]	PubMed: 40440343
Molecular landscape and functional characterization of centrosome amplification in ovarian cancer [ Nat Commun, 2023, 14(1):6505]	PubMed: 37845213
KIF24 depletion induces clustering of supernumerary centrosomes in PDAC cells [ Life Sci Alliance, 2022, 5(11)e202201470]	PubMed: 35803737
Terminally differentiated osteoclasts organize centrosomes into large clusters for microtubule nucleation and bone resorption [ Mol Biol Cell, 2022, mbcE22030098]	PubMed: 35511803
IFT proteins interact with HSET to promote supernumerary centrosome clustering in mitosis. [ EMBO Rep, 2020, 9:e49234]	PubMed: 32270908
Unraveling mitotic protein networks by 3D multiplexed epitope drug screening [ Mol Syst Biol, 2018, 14(8):e8238]	PubMed: 30104419
Centrosome Clustering Is a Tumor-selective Target for the Improvement of Radiotherapy in Breast Cancer Cells [Choe MH Anticancer Res, 2018, 38(6):3393-3400]	PubMed: 29848688
Precocious Centriole Disengagement and Centrosome Fragmentation Induced by Mitotic Delay [ Nat Commun, 2017, 13;8:15803]	PubMed: 28607478

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