CPI-613 (Devimistat)

Devimistat (CPI-613) produce tossicità selettiva in vitro contro diverse linee cellulari tumorali, incluse cellule di cancro del polmone umano H460 e cellule di sarcoma umano Saos-2, con valori di EC50 di 120 μM e 120 μM, rispettivamente. Interrompe il metabolismo mitocondriale delle cellule tumorali H460, inclusa l'inibizione dell'attività del complesso PDH e la perdita del potenziale di membrana mitocondriale in modo tempo- e dose-dipendente dal farmaco. Inoltre, questo composto (240 μM) induce anche la morte cellulare apoptotica e non apoptotica nelle cellule di cancro del polmone umano H460 e nelle cellule di sarcoma umano Saos-2. [1]

Devimistat (CPI-613) ha una potente attività antitumorale in un modello di xenotrapianto tumorale umano di una cellula tumorale pancreatica (BxPC-3) a 25 mg/kg. Allo stesso modo, questo composto (10 mg/kg) produce anche una significativa inibizione della crescita tumorale del carcinoma polmonare non a piccole cellule umano H460 in un modello murino. Inoltre, produce poca o nessuna tossicità da effetti collaterali nei range di dose terapeutici attesi in modelli animali di grandi dimensioni e ha la dose massima tollerata di 100 mg/kg nei topi. [1]

• Fosforilazione di E1α

  Le cellule vengono seminate e coltivate durante la notte. Cinque piastre per gruppo di test vengono trattate con Devimistat (CPI-613) o solvente. Le cellule vengono lisate in situ con 150 μL di tampone di lisi A [455 μL di solubilizzatore di proteine Zoom 2D 1, 2,5 μL di Tris base 1M, 5 μL di cocktail inibitore di proteasi 100X; 5 μL di DTT 2M] e i lisati di tutte le cinque piastre vengono raggruppati in una provetta da microcentrifuga da 1,5 mL e sonicati su ghiaccio per 15 passaggi al 50% di potenza. Dopo un'incubazione di 10 minuti a temperatura ambiente, vengono aggiunti 2,5 μL di dimetilacrilamide (DMA) e i lisati vengono incubati per altri 10 minuti. Vengono aggiunti 5 μL di DTT 2M per neutralizzare l'eccesso di DMA. I lisati vengono centrifugati per 15 minuti e il supernatante viene recuperato. Quindi, 40 μL di lisato vengono miscelati con 0,8 μL di anfoliti pH 3-10, 0,75 μL di DTT 2M e portati a 150 μL con solubilizzatore di proteine Zoom 2D 1. Vengono caricati 150 μL di campione nell'IPG runner e vengono aggiunte strisce IPG pH 3-10NL. Le strisce vengono immerse durante la notte a temperatura ambiente. Viene utilizzato un protocollo a gradini per la focalizzazione isoelettrica (250V, 20min.; 450V 15min; 750V 15min 2000V 30 minuti). Per la seconda dimensione, le strisce vengono trattate per 15 minuti in tampone di carico 1X, seguite da 15 minuti in tampone di carico 1X più 160 mM di acido iodoacetico. Le strisce vengono sottoposte a elettroforesi su gel NuPAGE 4-12% Bis Tris ZOOM. Le proteine vengono trasferite su membrane PVDF da 4,5 μm. Le serine 232, 293 e 300 sono bersagli dei tre eventi di fosforilazione PDK ben caratterizzati che controllano l'attività di E1. Quantità uguali di proteine da cellule trattate e trattate con placebo vengono caricate su gel e i Western blot vengono sondati con anticorpo anti-E1α come controllo di corrispondenza interno o uno dei tre anticorpi anti-fosfo-E1α.

• Linee cellulari

  HN6 cells

• Concentrazioni

  100 μM

• Tempo di incubazione

  24 h

• Metodo

  Cells were treated with or without 100 μM Devimistat (CPI-613) for 24 h.

• Modelli animali

  BxPC-3 and H460 cells are injected s.c. into the dorsal flank of CD1 nu/nu mice.

• Dosaggi

  ≤25 mg/kg

• Somministrazione

  Administered via i.p.