CP-91149

CP-91149 mostra un'attività inibitoria 200 volte superiore contro la glicogeno fosforilasi a epatica umana (HLGPa) rispetto alla caffeina (IC50 = 26 μM). Questo composto (10-100 μM) inibisce la glicogenolisi stimolata in epatociti di ratto isolati in modo dose-dipendente e in epatociti umani primari con un IC50 di ~2,1 μM. [1] Inoltre, inibisce potentemente le attività della fosforilasi muscolare umana a e b con IC50 di 0,2 μM e ~0,3 μM, rispettivamente. Il trattamento con questa sostanza chimica a 2,5 μM induce l'inattivazione della fosforilasi e l'attivazione sequenziale della glicogeno sintasi negli epatociti, e aumenta la sintesi del glicogeno di 7 volte a 5 mM di glucosio e di 2 volte a 20 mM di glucosio. Può parzialmente contrastare gli effetti della sovraespressione della fosforilasi. [2] Questo composto inibisce anche potentemente la GP cerebrale con IC50 di 0,5 μM nelle cellule A549. Il trattamento a 10-30 μM provoca un significativo accumulo di glicogeno nelle cellule A549 e HSF55. Il trattamento aumenta le cellule in fase G1 con una significativa riduzione della popolazione in fase S nelle cellule HSF55, correlata all'aumentata espressione di p21 e p27. [3] Questa sostanza chimica promuove anche la defosforilazione e l'attivazione della GS (glicogeno sintasi) nelle cellule muscolari umane coltivate non ingegnerizzate o che sovraesprimono GP, ma esclusivamente nelle cellule private di glucosio. [4]

La somministrazione orale di CP-91149 a topi diabetici ob/ob a 25-50 mg/kg provoca una rapida (3 ore) riduzione della glicemia di 100-120 mg/dl senza produrre ipoglicemia, derivante dall'inibizione della glicogenolisi in vivo. Il trattamento con questo composto non abbassa i livelli di glucosio in topi normoglicemici e non diabetici. [1] Nei ratti Goto-Kakizaki (GK) non a digiuno, la somministrazione di questa sostanza chimica in combinazione con CS-917 sopprime la riduzione del glicogeno epatico da parte di CS-917 e diminuisce il glucosio plasmatico più della singola somministrazione di CS-917. [5]

• Saggio enzimatico di Phosphorylase

  L'attività della glicogeno fosforilasi a epatica umana (HLGPa, 85 ng) viene misurata nella direzione della sintesi del glicogeno attraverso il rilascio di fosfato dal glucosio-1-fosfato a 22°C in 100 μL di tampone contenente 50 mM Hepes (pH 7,2), 100 mM KCl, 2,5 mM EGTA, 2,5 mM MgCl₂, 0,5 mM glucosio-1-fosfato e 1 mg/mL di glicogeno. Il fosfato viene misurato a 620 nm, 20 minuti dopo l'aggiunta di 150 μL di HCl 1 M contenente 10 mg/mL di molibdato di ammonio e 0,38 mg/mL di verde malachite. Concentrazioni crescenti di questo composto vengono aggiunte al saggio in 5 μL di DMSO al 14%.

• Linee cellulari

  HSF55 and T98G

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~50 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Cells are exposed to various concentrations of CP-91149 for 72hours. Viability is determined with manual cell counts following staining with trypan blue exclusion assay. Cells are fixed with 70% ethanol. DNA is stained with propidium iodide and the intensity of fluorescence is measured using a Becton-Dickinson flow cytometer at 488nm for excitation and at 650nm for emission. The cell cycle profile is analyzed using Modifit's Sync Wizard.

• Modelli animali

  Obese, diabetic male C57BL/6J-Lep^(ob/ob) mice and their lean, nondiabetic C57BL/6J-/+ littermates

• Dosaggi

  ~50 mg/kg

• Somministrazione

  Orally