Chaetocin

Nelle cellule di coltura tissutale SL-2 di Drosophila, la Chaetocin causa l'inibizione di SU(VAR)3-9 e del numero di molecole di H3 dimetilate in Lys9, e inibisce anche la crescita cellulare. [1]

Nelle cellule di epatoma umano HepG2, Hep3B e Huh7, questo composto inibisce le risposte ipossiche mediate da HIF-1. [2]

Inibisce anche potentemente la proliferazione e la formazione di colonie in un'ampia gamma di linee cellulari tumorali con IC50 di 2-10 nM. [3]

Nei topi portatori di tumore Hepa 1c1c-7, Chaetocin (0,25 mg/kg, i.p.) inibisce la crescita tumorale deregolando l'angiogenesi mediata da HIF-1[alpha]. [2]

Nei topi nudi portatori di tumore SKOV3, il trattamento con questo composto (0,25 mg/kg, i.p.) ritarda significativamente la crescita tumorale con prove minime di tossicità. [3]

• Saggi di metilazione

  Salvo diversa indicazione, le reazioni sono eseguite come segue: 1 g di enzima purificato (dSU(VAR)3-9 213; GST-hSUV39H1(82-412); GST-ncDIM5(19-318) e GSTmG9a(621-1000); dPRSET7(1-691); His-SET7/9(109-366) o complesso enzimatico espresso in un sistema di espressione baculovirale (dE(z), dSU(Z)12, dp55, dESC)) sono stati incubati per 30 minuti con 1 g di un peptide contenente i primi 19 amminoacidi di H3 più un residuo aggiuntivo di cisteina (ARTKQTARKSTGGKAPRKQC) in un volume totale di 40 μl in BC25 (10 mM HEPES pH 7,6, 25 mM NaCl, 1 mM EDTA, 10% glicerolo). Tutti gli enzimi, eccetto il complesso E(z), avevano un'attività specifica simile tra 5-10 nmole/min/mg. Per il complesso E(z), l'attività specifica è circa 5-10 volte inferiore, il che è probabilmente dovuto a una formazione incompleta del complesso completo necessaria per l'attività più elevata. Come donatore di metile, la S-Adenosil [metil-3H] metionina (SAM) è presente nella reazione a una concentrazione finale di 40 M con un'attività specifica di 0,3 Ci/mmole. Le reazioni vengono interrotte aggiungendo 1/10 del volume di acido acetico al 100% e l'incorporazione di radioattività viene misurata ponendo 30 μl della reazione su carta da filtro P81 e successiva conta per scintillazione. Per lo screening degli inibitori, 1 μl di questo composto con una concentrazione di 10 g/l viene aggiunto a ciascuna reazione. Nei casi in cui PRSET7 o il complesso E(z) vengono utilizzati come enzima, nucleosomi ricombinanti (1 g) o H3 ricombinante (1 g) hanno rispettivamente sostituito il peptide H3 come substrato.

• Linee cellulari

  HEK293T

• Concentrazioni

  125 nM

• Tempo di incubazione

  24 h

• Metodo

  Cells were treated with chaetocin (125 nM) or DMSO for 24 h.

• Modelli animali

  Hur7 tumor-bearing mice, Hepa 1c1c-7 tumor-bearing mice

• Dosaggi

  0.25 mg/kg

• Somministrazione

  i.p.