In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension
15% Captisol
Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.
10.000mg/ml
(19.33mM)
Taking the 1 mL working solution as an example, take 10 mg of this product, add it to 1 ml of 15% Captisol clear solution, and mix evenly to form a uniform suspension. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
Agerafenib (CEP-32496) è un inibitore altamente potente di BRAF(V600E/WT) e c-Raf con Kd di 14 nM/36 nM e 39 nM, rispettivamente. Mostra anche una potente attività contro Abl-1, c-Kit, Ret (c-Ret), PDGFRβ e VEGFR2, ma ha un'affinità insignificante per MEK-1, MEK-2, ERK-1 e ERK-2. Questo composto è attualmente in studi clinici di Fase 1/2.
Agerafenib (CEP-32496) inibisce la proliferazione delle cellule A375 (BRAFV600E) con una EC50 di 78 nM. Esibisce una citotossicità più sensibile per le linee cellulari tumorali (A375, SK-MEL-28, Colo-205, Colo-679 e HT-144) che esprimono BRAF mutato rispetto a quelle che esprimono BRAF wild-type (HCT116, Hs578T, LNCaP, DU145 e PC-3). Questo composto inibisce la fosforilazione della chinasi MAP (proteina attivata da mitogeni)/ERK (regolata da segnale extracellulare) (MEK) (pMEK) nelle linee cellulari di melanoma umano (A375) e cancro colorettale (Colo-205) con valori di IC50 di 78 nM e 60 nM, rispettivamente.
In vivo
Agerafenib (CEP-32496) mostra una buona stabilità in preparazioni microsomiali epatiche di topo, cane, scimmia e uomo con valori di clearance intrinseca misurati di <23 (μL/min)/mg e t1/2 > 60 min in tutti i saggi. Questo composto (30 mg/kg, per via orale, BID) mostra stasi tumorale e un'incidenza del 40% di regressioni tumorali parziali (PR) nel modello murino di xenotrapianto Colo-205, mentre il gruppo di dose di 100 mg/kg mostra sia stasi tumorale che un'incidenza dell'80% di PR. Esso (30 mg/kg, per via orale, BID) porta a un'inibizione del 50% e 75% del pMEK normalizzato nei lisati tumorali ai punti temporali di 2 ore e 6 ore dopo la dose, rispettivamente, mentre una dose di 55 mg/kg si traduce in un'inibizione del 75% al 57% del pMEK da 2 ore a 10 ore dopo la somministrazione nel modello murino di xenotrapianto Colo-205. È biodisponibile per via orale in diverse specie precliniche (>95% in ratti, cani e scimmie). Questo composto (100 mg/kg) provoca l'inibizione di pMEK e pERK e una stasi e regressioni tumorali sostenute in xenotrapianti di carcinoma del colon BRAF(V600E) in topi nudi.
Caratteristiche
Elevata affinità di legame sia per la mutazione BRAF (V600E) che per il c-Raf correlato, ma nessuna affinità significativa per altre chinasi della via MAPK.
Le chinasi vengono prodotte visualizzate su fagi T7 o mediante espressione in cellule HEK-293 e taggate con DNA. Le reazioni di legame vengono eseguite a temperatura ambiente per 1 ora e la frazione di chinasi non legata al composto test viene determinata mediante cattura con un ligando di affinità immobilizzato e quantificazione mediante PCR quantitativa. Ogni chinasi viene testata individualmente contro Agerafenib (CEP-32496). I valori di Kd per questo composto sono determinati utilizzando undici diluizioni seriali a 3 volte e presentati come valori medi da esperimenti eseguiti in duplicato. La variabilità tra i valori individuali è inferiore a 2 volte.
Cells are seeded at 104 cells per well in DMEM with 10% fetal calf serum and allowed to attach. After washing with PBS, the cells are switched to DMEM with 0.5% of serum and incubated overnight. Agerafenib (CEP-32496) is then added at various concentrations with a final DMSO concentration of 0.5% and incubated for 72 h. At the end of incubation, a Cell Titer Blue is added per instructions, and incubation is continued for 3 hours. Remaining viable cells are quantified by measuring the strength of the fluorescence signal using SoftMax Pro (excitation at 560 nm and emission at 590 nm). IC50 values are derived using a 9-point curve fitted with Igor Pro and are presented as mean values from experiments performed in duplicate. Variability between individual values is less than 2-fold.
Sellecks Agerafenib (CEP-32496) È stato citato da 6 Pubblicazioni
Novel Human-Derived RET Fusion NSCLC Cell Lines Have Heterogeneous Responses to RET Inhibitors and Differential Regulation of Downstream Signaling
[ Mol Pharmacol, 2021, 99(6):435-447]
RET inhibition in novel patient-derived models of RET-fusion positive lung adenocarcinoma reveals a role for MYC upregulation
[ Dis Model Mech, 2020, dmm.047779]
Comparative analysis of the phototoxicity induced by BRAF inhibitors and alleviation through antioxidants.
[ Photodermatol Photoimmunol Photomed, 2019, 10.1111/phpp.12520]
TLR7/8-agonist-loaded Nanoparticles Promote the Polarization of Tumour-Associated Macrophages to Enhance Cancer Immunotherapy
[ Nat Biomed Eng, 2018, 2(8):578-588]
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