AZD5363 (Capivasertib)

Capivasertib (AZD5363) è un potente inibitore di Akt con IC50 di 3 nM, 8 nM e 8 nM per Akt1, Akt2 e Akt3, rispettivamente. [1] Inibisce la fosforilazione dei substrati di Akt nelle cellule con una potenza di circa 0,3-0,8 μM. Questo composto inibisce la proliferazione di 41 delle 182 linee cellulari tumorali solide ed ematologiche con una potenza < 3 μM. [2] Le mutazioni attivanti in PIK3CA, la perdita o l'inattivazione del soppressore tumorale PTEN, o l'amplificazione di HER2 sono tutte significativamente predittive della responsività ad AZD5363. Inoltre, si osserva anche una correlazione tra lo stato di mutazione RAS delle linee cellulari e la resistenza ad esso. [1]

La somministrazione orale di Capivasertib (AZD5363) (100, 300 mg/kg) a topi nudi causa una riduzione dose- e tempo-dipendente della fosforilazione di PRAS40, GSK3β e S6 negli xenotrapianti BT474c, aumenti reversibili delle concentrazioni di glucosio nel sangue e diminuzioni dose-dipendenti dell'assorbimento di 2[¹⁸F]fluoro-2-deossi-d-glucosio (¹⁸F-FDG) negli xenotrapianti U87-MG. La somministrazione orale cronica di questo composto (130, 200 e 300 mg/kg) causa un'inibizione della crescita dose-dipendente degli xenotrapianti derivati da vari tipi di tumore, inclusi modelli di cancro al seno HER2+.

• Saggio di spostamento della mobilità per incubazione fuori chip Caliper

  La capacità di Capivasertib (AZD5363) e di altri composti di inibire l'attività di AKT1, AKT2 e AKT3 viene valutata mediante il saggio Caliper Off-Chip Incubation Mobility Shift. L'AKT1, AKT2 o AKT3 ricombinante attiva viene incubata con un substrato peptidico sintetizzato su misura marcato con 5-FAM insieme a concentrazioni crescenti di questo composto. Le reazioni finali contenevano da 1 a 3 nM di enzimi AKT1, AKT2 o AKT3; 1,5 mM di substrato peptidico; ATP a K _m per ogni isoforma di AKT; 10 mM di MgCl₂, 4 mM di DTT, 100 mM di HEPES e 0,015% di Brij-35. Le reazioni vengono incubate a temperatura ambiente per 1 ora e interrotte mediante l'aggiunta di un tampone contenente 100 mM di HEPES, 0,015% di soluzione di Brij-35, 0,1% di reagente di rivestimento, 40 mM di EDTA e 5% di DMSO. Le piastre vengono quindi analizzate utilizzando un Caliper LC3000, consentendo la separazione del substrato peptidico e del prodotto fosforilato mediante elettroforesi con successiva rilevazione e quantificazione della fluorescenza indotta da laser.

• Linee cellulari

  182 solid and hematologic tumor cell lines

• Concentrazioni

  ~30 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Cell proliferation assay is determined by 2 methods, MTS and Sytox Green, using Capivasertib (AZD5363). Briefly, cells are seeded in 96-well plates and incubated overnight at 37 ℃, 5% CO₂. Cells are then exposed to concentrations of this compound ranging from 30 to 0.003μM for 72 hours. For the MTS endpoint, cell proliferation is measured by the CellTiter AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay reagent in accordance with the manufacturer's protocol. For the Sytox Green endpoint, Sytox Green nucleic acid dye diluted in TBS-EDTA buffer is added to cells (final concentration of 0.13 μM) and the number of dead cells detected using an Acumen Explorer. Cells are then permeabilized by the addition of saponin (0.03% final concentration, diluted in TBS-EDTA buffer), incubated overnight and a total cell count measured. Predose measurements are made for both MTS and Sytox Green endpoints, and concentration needed to reduce the growth of treated cells to half that of untreated cells values are determined using absorbance readings (MTS) or live cell counts.

• Modelli animali

  Female nude mice and male SCID mice with BT474c, U87MG, KPL-4, HCC-1187 xenografts.

• Dosaggi

  130 mg/Kg - 300 mg/Kg

• Somministrazione

  p.o.