BX-912

N. catalogoS1275 Lotto:S127501

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Dati tecnici

Formula

C₂₀H₂₃BrN₈O

Peso molecolare

471.35

Numero CAS

702674-56-4

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

94 mg/mL (199.42 mM)

Ethanol

94 mg/mL (199.42 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	30%PEG400 1 0.5%Tween80 2 5%propylene glycol Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	30.000mg/ml (63.65mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 300 μL of 100 mg/ml clarified PEG400 stock solution to 5 μL of Tween80, mix evenly to clarify it; add 50 μL Propylene glycol to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 645 μL ddH2O to adjust the volume. to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

BX912 è un inibitore potente e specifico di PDK1 con IC50 di 12 nM, una selettività 9 e 105 volte maggiore per PDK1 rispetto a PKA e PKC in saggi senza cellule, rispettivamente. In confronto a GSK3 , la selettività per PDK1 è 600 volte.

Target

PDK-1 (Cell-free assay)	PKA (Cell-free assay)	KDR (Cell-free assay)	CDK2/CyclinE (Cell-free assay)	Chk1 (Cell-free assay)	Visualizza altro
12 nM	110 nM	410 nM	650 nM	830 nM	Visualizza altro

In vitro

BX912 previene ChcK1, PKA, c-kit e KDR con IC50 di 0,83, 0,11, 0,85 e 0,41 , rispettivamente. BX912 blocca la segnalazione PDK1/Akt nelle cellule tumorali e sopprime la crescita dipendente dall'ancoraggio di una varietà di linee cellulari tumorali (come le cellule PC-3) in coltura o induce l'apoptosi. Diverse linee cellulari tumorali (come il cancro al seno MDA-468) con attività Akt elevata sono >30 volte più sensibili all'inibizione della crescita da parte dell'inibitore di PDK1 BX912 in agar molle rispetto alla plastica per colture tissutali, coerentemente con la funzione di sopravvivenza cellulare della via di segnalazione PDK1/Akt, che è particolarmente importante per le cellule non adese. BX912 blocca potentemente l'attività enzimatica di PDK1 in un formato di saggio chinasico diretto, sebbene BX912 non riesca a bloccare l'attività di AKT2 preattivata (IC50 > 10 ). Pertanto, BX-912 è un inibitore diretto di PDK1. BX912 è un inibitore competitivo dell'attività di PDK1 rispetto al suo substrato, ATP, suggerendo che BX912 si lega alla tasca di legame dell'ATP di PDK1. Lo scheletro di aminopirimidina di BX912 adotta un orientamento simile nel sito attivo di PDK1. BX912 promuove un aumento pronunciato della popolazione di cellule MDA-468 con un contenuto di DNA 4 N, indicativo di un blocco nella fase G2/M del ciclo cellulare. BX912 inibisce anche potentemente la crescita delle cellule HCT-116 in agar molle, mostrando un effetto inibitorio del 96% a una dose di 1 . BX912 inibisce potentemente la crescita delle cellule PC-3 in agar molle, mostrando una IC50 di 0,32 .

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[1]}	Saggi chinasici PDK1 viene saggiato in un saggio chinasico diretto e in un formato di saggio accoppiato che misura l'attivazione di AKT2 mediata da PDK1 e PtdIns-3,4-P2. Per il saggio accoppiato, la miscela finale del saggio (60 L) conteneva: 15 mM MOPS, pH 7,2, 1 mg/mL di albumina di siero bovino, 18 mM -glicerolo fosfato, 0,7 mM ditiotreitolo, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7,5 M ATP, 0,2 Ci di [- ³³P]ATP, 7,5 M di substrato peptidico biotinilato (biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0,5 L di vescicole fosfolipidiche contenenti PtdIns-3,4-P2, 60 pg di PDK1 umano ricombinante purificato e 172 ng di AKT2 umano ricombinante purificato. Dopo incubazione per 2 ore a temperatura ambiente, il peptide marcato con biotina viene catturato da 10 L della miscela di saggio su sfere SPA rivestite di streptavidina e la formazione del prodotto viene misurata mediante prossimità di scintillazione in un contatore Wallac MicroBeta. Il prodotto formato è proporzionale al tempo di incubazione e alla quantità di PDK1 e AKT2 inattiva aggiunta. PDK1 viene aggiunto a livelli suboptimali in modo che il saggio possa rilevare con sensibilità gli inibitori dell'attivazione di AKT2, nonché l'inibitore diretto BX912 di PDK1 o AKT2. Per misurare direttamente l'attività di PDK1, la miscela finale del saggio (60 L) conteneva 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 0,1 mM EDTA, 0,1% -mercaptoetanolo, 1 mg/mL di albumina di siero bovino, 10 mM MgOAc, 10 M ATP, 0,2 Ci di [- ³³P]ATP, 7,5 M di peptide substrato (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) e 60 ng di PDK1 umano ricombinante purificato. Dopo 4 ore a temperatura ambiente, vengono aggiunti 25 mM di EDTA e una parte della miscela di reazione viene depositata su carta di fosfocellulosa P81. La carta da filtro viene lavata tre volte con acido fosforico allo 0,75% e una volta con acetone. Dopo l'asciugatura, il peptide marcato legato al filtro viene quantificato utilizzando un fosforimager.
Saggio cellulare:^{^[1]}	Linee cellulari MDA-468, MDA-453 Concentrazioni 0.001-1 μM Tempo di incubazione 72 hours Metodo Cells such as MDA-468, MDA-453 are seeded at a low density (1.5-3 × 10³ cells/well, 0.1 mL/well, 96-well plates) and are incubated overnight. BX912 treatments are made by adding 10 μL/well of the compound in 1% dimethyl sulfoxide and growth medium (final concentration of dimethyl sulfoxide, 0.1%), followed by brief shaking. Treated cells are incubated for 72 hours, and viability is measured by the addition of 10 μL of the metabolic dye WST-1. The WST-1 signal is read in a plate reader at 450 nm, and a no cell, or zero time cell, background is subtracted to calculate the net signal.

Saggio della chinasi:^{^[1]}

Saggi chinasici
PDK1 viene saggiato in un saggio chinasico diretto e in un formato di saggio accoppiato che misura l'attivazione di AKT2 mediata da PDK1 e PtdIns-3,4-P2. Per il saggio accoppiato, la miscela finale del saggio (60 L) conteneva: 15 mM MOPS, pH 7,2, 1 mg/mL di albumina di siero bovino, 18 mM -glicerolo fosfato, 0,7 mM ditiotreitolo, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7,5 M ATP, 0,2 Ci di [- ³³P]ATP, 7,5 M di substrato peptidico biotinilato (biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0,5 L di vescicole fosfolipidiche contenenti PtdIns-3,4-P2, 60 pg di PDK1 umano ricombinante purificato e 172 ng di AKT2 umano ricombinante purificato. Dopo incubazione per 2 ore a temperatura ambiente, il peptide marcato con biotina viene catturato da 10 L della miscela di saggio su sfere SPA rivestite di streptavidina e la formazione del prodotto viene misurata mediante prossimità di scintillazione in un contatore Wallac MicroBeta. Il prodotto formato è proporzionale al tempo di incubazione e alla quantità di PDK1 e AKT2 inattiva aggiunta. PDK1 viene aggiunto a livelli suboptimali in modo che il saggio possa rilevare con sensibilità gli inibitori dell'attivazione di AKT2, nonché l'inibitore diretto BX912 di PDK1 o AKT2. Per misurare direttamente l'attività di PDK1, la miscela finale del saggio (60 L) conteneva 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 0,1 mM EDTA, 0,1% -mercaptoetanolo, 1 mg/mL di albumina di siero bovino, 10 mM MgOAc, 10 M ATP, 0,2 Ci di [- ³³P]ATP, 7,5 M di peptide substrato (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) e 60 ng di PDK1 umano ricombinante purificato. Dopo 4 ore a temperatura ambiente, vengono aggiunti 25 mM di EDTA e una parte della miscela di reazione viene depositata su carta di fosfocellulosa P81. La carta da filtro viene lavata tre volte con acido fosforico allo 0,75% e una volta con acetone. Dopo l'asciugatura, il peptide marcato legato al filtro viene quantificato utilizzando un fosforimager.

Saggio cellulare:^{^[1]}

Linee cellulari
MDA-468, MDA-453
Concentrazioni
0.001-1 μM
Tempo di incubazione
72 hours
Metodo
Cells such as MDA-468, MDA-453 are seeded at a low density (1.5-3 × 10³ cells/well, 0.1 mL/well, 96-well plates) and are incubated overnight. BX912 treatments are made by adding 10 μL/well of the compound in 1% dimethyl sulfoxide and growth medium (final concentration of dimethyl sulfoxide, 0.1%), followed by brief shaking. Treated cells are incubated for 72 hours, and viability is measured by the addition of 10 μL of the metabolic dye WST-1. The WST-1 signal is read in a plate reader at 450 nm, and a no cell, or zero time cell, background is subtracted to calculate the net signal.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15772071/

Convalida del prodotto da parte del cliente

: , , Oncotarget, 2014, 5(21):10732-44.

: Dati da [ , , Am J Respir Cell Mol Biol, 2018, 59(3):295-305 ]

Sellecks BX-912 È stato citato da 14 Pubblicazioni

Deregulation and epigenetic modification of BCL2-family genes cause resistance to venetoclax in hematologic malignancies [ Blood, 2022, blood.2021014304]	PubMed: 35704690
The 3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1 is an essential upstream activator of protein kinase A in malaria parasites [ PLoS Biol, 2021, 19(12):e3001483]	PubMed: 34879056
Effects of inhibiting PDK‑1 expression in bone marrow mesenchymal stem cells on osteoblast differentiation in vitro [ Mol Med Rep, 2021, 23(2)118]	PubMed: 33300048
Application of a Biphasic Mathematical Model of Cancer Cell Drug Response for Formulating Potent and Synergistic Targeted Drug Combinations to Triple Negative Breast Cancer Cells. [ Cancers (Basel), 2020, 27;12(5)pii: E1087]	PubMed: 32349331
Biphasic Mathematical Model of Cell-Drug Interaction That Separates Target-Specific and Off-Target Inhibition and Suggests Potent Targeted Drug Combinations for Multi-Driver Colorectal Cancer Cells. [ Cancers (Basel), 2020, 13;12(2) pii: E436]	PubMed: 32069833
Gene Essentiality Profiling Reveals Gene Networks and Synthetic Lethal Interactions with Oncogenic Ras. [ Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 28162770
A Pharmacogenomic Landscape in Human Liver Cancers. [ Cancer Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 31378681
Mapping phospho-catalytic dependencies of therapy-resistant tumours reveals actionable vulnerabilities. [ Nat Cell Biol, 2019, 21(6):778-790]	PubMed: 31160710
Discoidin Domain Receptor 2 Signaling Regulates Fibroblast Apoptosis through PDK1/Akt [Jia S Am J Respir Cell Mol Biol, 2018, 59(3):295-305]	PubMed: 29652518
Systematic Functional Characterization of Resistance to PI3K Inhibition in Breast Cancer. [ Cancer Discov, 2016, 6(10):1134-1147]	PubMed: 27604488

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