In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
Brilanestrant (GDC-0810, ARN-810) è un potente legante di ER-α (ER-α, IC50 = 6,1 nM; ER-β, IC50 = 8,8 nM). Questo composto è un antagonista trascrizionale completo senza agonismo e mostra una buona potenza ed efficacia nella degradazione di ER-α (EC50 = 0,7 nM) e nella vitalità delle cellule di cancro al seno MCF-7 (IC50 = 2,5 nM) con buona selettività rispetto ad altri recettori ormonali nucleari.
Target
ERα (Cell-free)
ERβ (Cell-free)
6.1 nM
8.8 nM
In vitro
Negli studi di legame competitivo con radioligando privi di cellule, Brilanestrant (GDC-0810) si lega sia all'ERα che all'ERβ con bassa affinità nanomolare. Questo composto ha poca o nessuna inibizione contro CYP1A2, CYP2D6 o CYP3A4 (IC50 > 20 μM), un modesto effetto inibitorio su CYP2C9 e CYP2C19 (IC50 = 2,2 e 3,3 μM rispettivamente) e una potente inibizione di CYP2C8 (IC50 di <0,1 μM). La sua selettività rispetto ad altri recettori ormonali nucleari è anche buona. Negli studi di reporter trascrizionale per i recettori dei mineralocorticoidi (MR), progesterone-A (PR-A), progesterone (PR-B) e glucocorticoidi (GR), ha un'attività minima (IC50 > 1 μM). Mentre negli studi di legame, mostra poca attività verso il recettore degli androgeni (AR; IC50 > 4 μM) e GR (IC50 = 0,99 μM). La deplezione di ERα mediata da GDC-0810 dipende dal proteasoma 26S. Antagonizza i mutanti del dominio di legame del ligando di ERα in vitro e in vivo. Negli studi di legame competitivo E2 privi di cellule, utilizzati per determinare il legame di questo composto ai domini di legame del ligando ER.WT, ER.Y537S e ER.D538G, esso mantiene la sua capacità di spostare potentemente E2 dal dominio di legame del ligando, sebbene con un IC50 leggermente aumentato (WT: 2,6 nM vs. ER.Y537S: 5,5 nM e ER.D538G: 5,4 nM). Può competere con il peptide co-attivatore PGC1α dal dominio di legame del ligando mutato, implicando che è in grado di guidare uno spostamento conformazionale da 'attivo' a 'inattivo' dell'ER mutante, sebbene con una riduzione di circa cinque-sette volte della potenza biochimica rispetto all'ER wild-type.
In vivo
Brilanestrant (GDC-0810) presenta un profilo farmacocinetico caratterizzato da una bassa clearance tra le specie e una buona biodisponibilità (40–60%). Come ci si aspetterebbe per un acido carbossilico lipofilo, il composto è fortemente legato alle proteine plasmatiche (>99,5% tra le specie) e ha un volume di distribuzione da basso a moderato (Vss = 0,2–2,0 L/kg tra le specie). Dimostra una buona biodisponibilità tra le specie e mostra una robusta attività in modelli di xenotrapianto di cancro al seno sensibili e resistenti al tamoxifene. Questo composto mostra anche una lieve attività estrogenica in modelli uterini in vitro e in vivo.
MCF-7 cells are trypsinized and washed twice in phenol red free RPMI containing 5% charcoal dextran stripped FBS with 20 mM HEPES and NEAA and adjusted to a concentration of 200000 cells per mL with the same medium. Next, 16 μL of the cell suspension (3200 cells) is added to each well of a poly-D-lysine coated 384-well plate, and the cells are incubated at 37℃ over 4 days to allow the cells to adhere and grow. On day 4, a 10-point, serial 1:5 dilution of Brilanestrant (GDC-0810) is added to the cells in 16 μL at a final concentration ranging from 10−5 M to 5.12 × 10−12 M or 10−6 M to 5.12 × 10−13 M for fulvestrant. At 4 h post compound addition, the cells are fixed by adding 16 μL of 30% formalin to the 32 μL of cells and this compound (10% formalin final concentration) for 20 min. Cells are then washed twice with PBS Tween 0.1% and then permeabilized in PBS 0.1% Triton (50 μL/well) for additional 15 min. The PBS 0.1% triton is decanted, and the cells are washed: LI-COR blocking buffer (50 μL/well) was added, the plate is spun at 3000 rpm, and then the blocking buffer is decanted. Additional LI-COR blocking buffer (50 μL/well) is added, and the cells are incubated overnight at 4℃. The blocking buffer is decanted, and the cells are incubated overnight at 4℃ with SP1 anti-ER rabbit monoclonal antibody diluted 1:1000 in LI-COR blocking buffer/0.1% Tween-20. Wells, which are treated with blocking buffer with Tween but no antibody, are used as a background control. Wells are washed twice with PBS Tween 0.1% to remove free SP1 antibodies, and the cells are incubated at room temp for 60−90 min in LI-COR goat antirabbit IRDyeTM 800CW (1:1000) and DRAQ5 DNA dye diluted in LI-COR blocking buffer containing 0.1% Tween-20 and 0.01% SDS. Cells are then washed with 0.1%Tween-20/PBS three times. Plates are scanned on a LI-COR Odyssey infrared imaging system.
Sellecks Brilanestrant (GDC-0810) È stato citato da 2 Pubblicazioni
G1T48, an oral selective estrogen receptor degrader, and the CDK4/6 inhibitor lerociclib inhibit tumor growth in animal models of endocrine-resistant breast cancer.
[ Breast Cancer Res Treat, 2020, 10.1007/s10549-020-05575-9]
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