Brefeldin A (BFA chemical)

La Brefeldina A (BFA) è un metabolita fungino che blocca il trasporto in avanti tra il reticolo endoplasmatico e l'apparato di Golgi, causando una distribuzione alterata delle proteine di membrana. Quando le cellule di cancro del colon umano HCT 116 vengono trattate con questo composto, si osservano cambiamenti morfologici che indicano la differenziazione cellulare. Esercita i suoi effetti citotossici principalmente inducendo la differenziazione e l'apoptosi nelle cellule tumorali. [1]

Il trattamento delle strisce con 20 μg/mL di BFA per 6 ore abolisce completamente il rilassamento indotto dalla bradichinina in presenza di 10mM di indometacina e 30 μM di L-NOARG. Il trattamento con 20 μg/mL di questo composto abolisce sostanzialmente le diminuzioni di [Ca²⁺]_i e di tensione indotte dalla bradichinina nell'intervallo di concentrazioni tra 1 nM e 1 mM. Non ha alcun effetto sull'elevazione di [Ca²⁺]_i nelle cellule endoteliali indotta dalla bradichinina o dalla sostanza P. [2]

L'aggiunta del metabolita fungino non influenza il legame spontaneo GTPS dipendente dai fosfolipidi a myr-rARF1 ma abolisce totalmente lo scambio catalizzato dall'estratto isotonico retinico (RIE), con inibizione semi-massimale a 2 μM. Previene una vasta varietà di percorsi di traffico di membrana e inibisce un'attività di scambio di nucleotidi guaninici specifica per il fattore di ADP-ribosilazione presente nelle membrane di Golgi o nel citosol cerebrale. La prevenzione completa da parte di questo composto suggerisce fortemente che l'estratto retinico contiene un fattore di scambio di nucleotidi guaninici specifico per ARF. Il rilascio di GTPS catalizzato dall'estratto isotonico retinico (RIE) da entrambi i fattori di ADP-ribosilazione (ARF) è solo parzialmente inibito dalla BFA, anche a 300 μM. [3]

Induce la fusione dell'apparato di Golgi con il RE e abolisce l'effetto inibitorio dell'inibitore CERT HPA-12. Il trattamento con questo composto, che induce la fusione dell'apparato di Golgi e del RE, salva la prevenzione della biosintesi della sfingomielina indotta dai limonoidi. Il suo trattamento delle cellule CHO provoca un aumento di 2 o 3 volte nella sintesi della sfingomielina. [4]

Oltre alle cellule B-CLL, la BFA, secondo quanto riferito, causa apoptosi nel mieloma multiplo (U266, NCI-H929), Jurkat, HeLa, leucemia (HL60, K562, BJAB), colon (HT-29) e prostata, nonché nelle cellule di sarcoma cistico adenoideo. La somministrazione di 25 ng/mL di questo composto blocca completamente la crescita delle cellule HF4.9 e HF28RA, mentre sono necessarie dosi più elevate (75 ng/mL) per ottenere lo stesso effetto nelle cellule HF1A3. La proliferazione cellulare è inibita entro 24 ore in modo dose-dipendente e, a seconda della linea cellulare, si osserva una cessazione quasi completa dell'incorporazione di ³H-timidina a 50-75 ng/mL (26%, 76%, 87% di inibizione a 50 ng/ml e 75%, 87%, 92% di inibizione a 75 ng/mL per le cellule HF1A3, HF4.9 e HF28RA rispettivamente. La morte cellulare indotta da BFA è dose-dipendente utilizzando il test YO-PRO 1/PI. [5]

Potrebbe migliorare l'efficienza della HDR (riparazione diretta per omologia) ed è un potenziatore della CRISPR-mediated HDR[6].

La Brefeldina A (BFA), un antibiotico lattone e inibitore specifico del traffico proteico, blocca il trasporto di proteine secrete e di membrana dal reticolo endoplasmatico all'apparato di Golgi.

• Linee cellulari

  Human follicular lymphoma cell lines HF1A3, HF4.9 and HF28RA

• Concentrazioni

  0 ng/mL -75 ng/mL

• Tempo di incubazione

  5 days

• Metodo

  HF1A3, HF4.9 cell viability upon the treatments is tested using double staining of cells with YO-PRO 1/PI and SYTO16/PI probes. To access cell proliferation, cells are treated with 0–100 ng/mL Brefeldin A (BFA) in complete medium for 20 hours before adding 1 μCi/mL [methyl-³H]-thymidine for additional 4 hours at 37 °C. The incorporated radioactive thymidine is quantified by scintillation counting with Microbeta counter. To examine long-term effects of this compound, cells are seeded at initial concentration 10⁵ cells/mL and treated with 0-75 ng/mL of it for up to 5 days. At the time indicated, a sample of cells is removed and viable cell number is assessed by standard Trypan Blue exclusion assay.

• Modelli animali

  C57BL/6 mice

• Dosaggi

  250 µg

• Somministrazione

  i.p.