BPTES

BPTES inibisce l'attività della glutaminasi espressa nelle cellule renali umane con IC50 di 0,18 μM, e inibisce l'efflusso di glutammato dalla microglia con IC50 di 80-120 nM. [1] Questo composto rallenta preferenzialmente la crescita cellulare nelle cellule D54 con IDH1 mutante. Inibisce anche l'attività della glutaminasi, abbassa i livelli di glutammato e α-KG e aumenta gli intermedi glicolitici. [2] Questa sostanza chimica (10 μM) inibisce la crescita delle cellule mHCC 3–4 derivate da tumori LAP/MYC. Inibisce anche la crescita delle cellule P493 dipendenti da MYC bloccando la replicazione del DNA, portando alla morte cellulare e alla frammentazione. [3]

Nei topi LAP/MYC, BPTES (12,5 mg/kg, i.p.) prolunga la sopravvivenza senza effetti significativi sui livelli di MYC, GLS o GLS2. Questo composto (200 μg/topo, i.p.) inibisce anche la crescita delle cellule tumorali nei topi che ospitano xenotrapianti tumorali P493. [3]

• Inibizione della Glutaminase: Saggio Cell Free

  Le piastre di saggio vengono preparate contenenti 2 μL del composto di prova in DMSO/pozzetto. L'enzima viene diluito a 1 unità (fegato) o 0,8 unità (rene)/100 μL nel tampone di saggio della glutaminasi, e 100 μL di enzima diluito vengono aggiunti a ciascun pozzetto della piastra di saggio tramite Multidrop. Il contenuto viene miscelato agitando a tutta velocità per 1 minuto su TiterMix 100. Le piastre vengono preincubate a temperatura ambiente (TA) per 20 minuti per consentire il legame dei composti di prova alla glutaminasi, e 50 μL di soluzione di glutammina (7 mM nel tampone di saggio) vengono aggiunti a ciascun pozzetto tramite Multidrop. Il contenuto viene agitato a tutta velocità per 30 secondi su TiterMix 100, e le piastre vengono quindi incubate a TA per 60 minuti (fegato) o 90 minuti (rene). Per arrestare le reazioni, 20 μL di HCl (0,3 N) vengono aggiunti a ciascun pozzetto tramite Multidrop e miscelati immediatamente agitando per 30 secondi su TiterMix 100. Per la quantificazione, il glutammato (formato dall'idrolisi della glutammina catalizzata dalla glutaminasi) viene ossidato a 2-ossoglutarato da un secondo enzima, la glutammato deidrogenasi (GDH), con la concomitante produzione della forma ridotta del nicotinamide adenina dinucleotide (NADH). La riduzione del nitro blu tetrazolio (NBT) nella soluzione di saggio da parte del NADH, catalizzata dal fenazin metosolfato (PMS), si traduce nella formazione di un formazano blu-viola. L'assorbimento del formazano a 540 nm è linearmente proporzionale alla concentrazione di glutammato fino a 200 μM. Il reagente NBT/GDH (50 μL) viene aggiunto a ciascun pozzetto tramite Multidrop e miscelato agitando per 30 secondi su TiterMix 100, e le piastre vengono incubate a TA per 20 minuti per consentire la formazione del colore dalla reazione GDH. La concentrazione di glutammato viene determinata dalla concentrazione di formazano come determinata dalla lettura dell'OD540 nm su uno SpectraMax 340.

• Linee cellulari

  D54 cells

• Concentrazioni

  --

• Tempo di incubazione

  48 h

• Metodo

  Cell growth assays are carried out using alamarBlue. Cells are plated at a density of 500 cells/well in a 96-well black clear bottom plate. At 24 hrs, media is changed to the appropriate media (DMEM with 4.5 g/L, 1.5 g/L or 0.1 g/L glucose, 10% FBS, pencillin/streptomycin, and 4 mM glutamine). 48 hours after plating, compounds or DMSO are added. Media and alamarBlue is added to a volume of 200 礚 in each well. Fluorescence is measured at 48 hrs (AOA, this compound) using a Victor3 plate-reader.

• Modelli animali

  LAP/MYC mice

• Dosaggi

  12.5 mg/kg

• Somministrazione

  i.p.