Bortezomib

Bortezomib, un dipeptide di acido boronico, è un inibitore altamente selettivo e reversibile del Proteasome 26S che funziona principalmente nella degradazione delle proteine mal ripiegate ed è essenziale per la regolazione del ciclo cellulare. L'esposizione a questo composto ha dimostrato di stabilizzare p21, p27 e p53, così come le proteine proapoptotiche Bid e Bax, la caveolina-1 e l'inibitore κB-α, che previene l'attivazione delle vie di sopravvivenza cellulare indotte dal fattore nucleare κB. Promuove anche l'attivazione della c-Jun-NH2 terminal chinasi proapoptotica, così come la risposta allo stress del reticolo endoplasmatico. L'alterazione dei livelli di queste proteine cellulari porta all'inibizione della proliferazione, della migrazione e alla promozione dell'apoptosi delle cellule tumorali. [2] Questo agente chimico ha dimostrato di penetrare nelle cellule e inibire la proteolisi intracellulare mediata dal Proteasome di proteine a lunga vita con una concentrazione che inibisce il 50% della proteolisi di circa 0,1 μM. La media dell'inibizione della crescita del 50% per questo composto su tutto il pannello di 60 linee cellulari tumorali derivate da molteplici tumori umani dell'US National Cancer Institute (NCI) è di 7 nM. Il trattamento delle cellule PC-3 con esso (100 nM) per 8 ore porta all'accumulo di cellule in G2-M, con una corrispondente diminuzione del numero di cellule in G1. Uccide le cellule PC-3 a 24 e 48 ore con IC50 di 100 e 20 nM, rispettivamente. Questo agente induce la condensazione nucleare 16-24 ore dopo il trattamento. Il suo trattamento porta alla scissione di PARP in modo tempo-dipendente con concentrazioni anche di 100 nM efficaci a 24 ore. [1]

Gli effetti antitumorali di Bortezomib come singolo agente sono stati dimostrati in modelli di xenotrapianto di mieloma multiplo, leucemia a cellule T adulte, cancro del polmone, della mammella, della prostata, del pancreas, della testa e del collo e del colon, e nel melanoma. [2] La somministrazione orale di questo composto a 1,0 mg/kg al giorno per 18 giorni causa ritardi nella crescita tumorale, così come una diminuzione del numero di metastasi nel modello di cancro del polmone di Lewis. Questo composto a una singola dose fino a 5 mg/kg ha significativamente diminuito la frazione sopravvissuta delle cellule tumorali mammarie. La somministrazione settimanale di questo agente chimico a 1,0 mg/kg per 4 settimane riduce la crescita tumorale del 60% in modelli di xenotrapianto murini di cancro alla prostata. Il trattamento con questo agente a 1,0 mg/kg per 4 settimane si traduce in una riduzione del 72% o 84% della crescita di xenotrapianti murini di cancro al pancreas, così come un aumento dell'apoptosi delle cellule tumorali. Questo composto a 1,0 mg/kg si traduce in una significativa inibizione della crescita di xenotrapianti di plasmocitoma umano, un aumento dell'apoptosi delle cellule tumorali e della sopravvivenza complessiva, e una diminuzione dell'angiogenesi tumorale. [3]

• Metodi Cinetiche

  In una tipica corsa cinetica, 2,00 mL di tampone di saggio (20 mM HEPES, 0,5 mM EDTA, 0,035% SDS, pH 7,8) e Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC in DMSO vengono aggiunti a una cuvetta di fluorescenza da 3 mL, e la cuvetta viene posta nel supporto cellulare con camicia di uno spettrofotometro di fluorescenza. La temperatura di reazione è mantenuta a 37 ℃ da un bagno a circolazione d'acqua. Dopo che la soluzione di reazione ha raggiunto l'equilibrio termico (5 minuti), 1 μL-10 μL della soluzione madre dell'enzima viene aggiunta alla cuvetta. Il progresso della reazione viene monitorato dall'aumento dell'emissione di fluorescenza a 440 nm (λ_ex= 380 nm) che accompagna il clivaggio dell'AMC dai substrati peptide-AMC.

• Linee cellulari

  Human multiple myeloma cells line U266

• Concentrazioni

  ~10 μM

• Tempo di incubazione

  2 days

• Metodo

  The inhibitory effect of Bortezomib on cell growth is assessed by measuring MTT dye absorbance of the cells. Cells from 48-hour cultures are pulsed with 10 μL of 5 mg/mL MTT to each well for the last 4 hour of 48-hour cultures, followed by 100 μL of isopropanol containing 0.04 N HCl. Absorbance is measured at 570 nm using a spectrophotometer.

• Modelli animali

  Human plasmacytoma xenografts RPMI 8226

• Dosaggi

  1 mg/kg

• Somministrazione

  i.v. twice weekly for 4 weeks, then once weekly