BMS-986142

Nelle cellule B stimolate attraverso il recettore delle cellule B (BCR), BMS-986142 inibisce potentemente la segnalazione e gli endpoint funzionali, inclusi il flusso di calcio (IC50 = 9 nM), la produzione di citochine, la proliferazione e l'espressione superficiale della molecola costimolatoria CD86 (IC50 = 3–4 nM). Nelle cellule T, la fosforilazione di PLCγ1 catalizzata da ITK stimolata attraverso il recettore delle cellule T (TCR) è almeno 45 volte meno potentemente inibita da questo composto rispetto agli endpoint di segnalazione dipendenti da BTK nelle cellule B, come previsto in base alla selettività 30 volte superiore per BTK rispetto a ITK negli saggi enzimatici[2].

In studi farmacocinetici multiespecie, la biodisponibilità orale assoluta di BMS-986142 è del 93% nei topi, 67% nei ratti, 33% nelle scimmie cynomolgus e 100% nei cani. La clearance plasmatica corporea totale di questo composto è bassa in tutte le specie. L'elevato volume di distribuzione allo stato stazionario osservato è indicativo di distribuzione extravascolare, nonostante l'alto legame proteico. Tuttavia, la penetrazione cerebrale è molto bassa nei ratti (<5% della concentrazione plasmatica). Questo composto blocca l'aumento della proteinuria grave in un modello murino femminile NZB/W incline al lupus in vivo. Il trattamento con questa sostanza chimica fornisce una robusta protezione contro la nefrite tubulo-interstiziale e glomerulare, così come l'infiltrazione infiammatoria[2].

• Saggio enzimatico di BTK ricombinante umana

  A piastre a 384 pozzetti con fondo a V sono stati aggiunti i composti in esame, BTK ricombinante umana (1 nM), peptide fluoresceinico (1,5 μM), ATP (20 μM) e tampone di saggio (20 mM HEPES a pH 7,4, 10 mM MgCl2, 0,015% di tensioattivo Brij 35 e 4 mM DTT in 1,6% DMSO), con un volume finale di 30 μL. Dopo incubazione a temperatura ambiente per 60 minuti, la reazione è stata terminata aggiungendo 45 μL di EDTA 35 mM a ciascun campione. La miscela di reazione è stata analizzata mediante separazione elettroforetica del substrato fluorescente e del prodotto fosforilato. I dati di inibizione sono stati calcolati per confronto con le reazioni di controllo senza enzima (per il 100% di inibizione) e i controlli senza inibitore (per lo 0% di inibizione). Sono state generate curve dose-risposta per determinare la concentrazione richiesta per inibire il 50% dell'attività di BTK (IC50). Questo composto è stato disciolto a 10 mM in DMSO e valutato a 11 concentrazioni.

• Linee cellulari

  Ramos B cells

• Concentrazioni

  0.4, 1.6, 6, 25, 100 and 400 nM

• Tempo di incubazione

  1 h

• Metodo

  B-cell receptor (BCR)-stimulated phospholipase C (PLC)-γ2 phosphorylation in Ramos B cells: After 1 hour of pre-incubation of Ramos B cells in media containing 10% fetal bovine serum (FBS) with varying concentrations of this compound at 37°C, the cells are stimulated with AffiniPure F(ab’)2 fragment goat anti-human immunoglobulin (Ig)M at 50 μg/mL for exactly 2 minutes at 37°C, followed by addition of ice-cold phosphate-buffered saline for quenching. The cells are pelleted and lysed, and PLCγ2 levels are measured by immunoblot using rabbit anti-human phosphoY759-PLCγ2 and analyzed using the Odyssey Infrared Imaging System with normalization to an actin control to ensure consistent loading.

• Modelli animali

  female NZB/W lupus-prone mouse model

• Dosaggi

  30 mg/kg

• Somministrazione

  by oral gavage