BMS-345541

BMS-345541 inibisce in modo dose-dipendente la fosforilazione di IκBα stimolata dal TNF-α in cellule monocitiche THP-1 con un IC50 di ~4 μM. Questo composto inibisce il fattore di necrosi tumorale α, l'interleuchina-1β, l'interleuchina-8 e l'interleuchina-6 stimolati dal lipopolisaccaride in cellule THP-1 con valori di IC50 nell'intervallo 1-5 μM. Si lega in modo mutuamente esclusivo rispetto a un inibitore peptidico corrispondente agli amminoacidi 26-42 di IκBα con Ser-32 e Ser-36 trasformate in aspartati e in modo non mutuamente esclusivo rispetto all'ADP. Questa sostanza chimica si lega a siti allosterici simili su IKK-1 e IKK-2, influenzando poi in modo diverso i siti attivi delle subunità. [1] Colpisce diverse transizioni del ciclo cellulare mitotico, inclusi l'ingresso mitotico, la progressione dalla prometafase all'anafase e la citocinesi. L'aggiunta di questo composto alle cellule rilasciate dall'arresto in fase G blocca l'attivazione di Aurora A, B e C, l'attivazione di Cdk1 e la fosforilazione dell'istone H3. Il trattamento delle cellule mitotiche con questa sostanza chimica porta a una degradazione precoce di ciclina B1 e securina, a una separazione cromosomica difettosa e a una citocinesi impropria. È stato anche riscontrato che supera il checkpoint del fuso in cellule arrestate da nocodazolo. Questi effetti non sono principalmente dovuti a un effetto inibitorio diretto di questo composto su chinasi mitotiche come Cdk1, Aurora A o B, Plk1 o NEK2. [2] Questo composto (10 μM) inibisce la crescita di melanociti epidermici umani normali e cellule di melanoma metastatico (SK-MEL-5, A375 e Hs 294T) rispettivamente del 96% e 99% a 72 ore. L'applicazione di 100 μM di esso alla coltura cellulare SK-MEL-5 provoca l'87% di cellule apoptotiche a 24 ore attraverso un meccanismo mediato dai mitocondri, indipendente dalle caspasi e dipendente dall'AIF. Il trattamento con questa sostanza chimica (10 μM) porta a una riduzione del 76% e del 95% delle attività IKK e NF-kB, nonché della produzione di CXCL1. [3] Inibisce la crescita delle linee cellulari di leucemia linfoblastica acuta a cellule T (T-ALL) BE-13, RPMI-8402 e DND-41, tutte e tre con una mutazione Notch1, e delle cellule primarie di T-ALL da pazienti pediatrici, con IC50 di 2-6 μM. 5 μM di questo composto inducono un arresto nella fase G2/M del ciclo cellulare nelle cellule BE-13 e DND-41, e un aumento del picco sub-G1 nelle cellule RPMI-8402. 5 μM di esso trattato per 16 ore porta a un aumento delle cellule apoptotiche in tutte queste cellule, accompagnato da una scissione tempo-dipendente di procaspasi-8, procaspasi-3 e poli(ADP-ribosio) polimerasi (PARP). Questa sostanza chimica (5 μM) induce una defosforilazione tempo-dipendente di IκBα e p65. Le cellule T-ALL trattate con essa mostrano traslocazione nucleare di FOXO3a e ripristino delle sue funzioni, incluso il controllo dei livelli di espressione di p21^Cip1. [4] Inibisce l'espressione indotta da TNFα sia di ICAM-1 che di VCAM-1 nelle cellule endoteliali della vena ombelicale umana con un IC50 di 5 μM. [5]

BMS-345541 inibisce efficacemente la crescita del tumore del melanoma in modo dose-dipendente. Topi portatori di tumore trattati con 75 mg/kg di questo composto mostrano un'efficace inibizione della crescita dei tumori SK-MEL-5, A375 e Hs 294T rispettivamente dell'86%, 69% e 67%, rispetto agli animali di controllo trattati solo con veicolo.[3] Questo composto, somministrato per via orale a dosi di 100 mg/kg, riduce la gravità della colite indotta da destrano solfato sodico nei topi con un rapporto ponderale, punteggio clinico dei colon, punteggio medio di lesione e punteggio medio di infiammazione rispettivamente di 0,86 (contro 0,77 del gruppo veicolo), 1,0 (contro 2,5 del gruppo veicolo), 5,66 (contro 8,52 del gruppo veicolo), 6,82 (contro 12,33 del gruppo veicolo). [6] Questa sostanza chimica (100 mg/kg), somministrata per via orale in acqua una volta al giorno a partire dal momento della prima immunizzazione con collagene, inibisce i segni clinici della malattia nel modello murino CIA (0 contro ~8 del gruppo veicolo), accompagnata da una ridotta tumefazione della zampa. Riduce il punteggio cumulativo di lesioni artritiche da 4,4 a 0, accompagnata da una minore degradazione delle articolazioni tibiotarsali e da una minore gravità di infiammazione, iperplasia sinoviale, riassorbimento osseo ed erosione cartilaginea. Nessuna lesione discernibile è osservata nelle articolazioni degli animali, che sono istologicamente indistinguibili da quelle di animali di controllo di pari età e senza malattia. Questo composto inibisce in modo dose-dipendente il messaggio di IL-1β, con animali nel gruppo di dose di 100 mg/kg che mostrano livelli comparabili a quelli di animali di controllo senza malattia. [7]

• Saggi enzimatici

  I saggi che misurano la fosforilazione enzimaticamente catalizzata di GST-IκBα vengono eseguiti aggiungendo l'enzima (una concentrazione finale di 0,5 μg/mL) a 30 ℃ a soluzioni di 100 μg/mL di GST-IκBα e 5 μM di [³³P]ATP in 40 mM Tris HCl, pH 7,5, contenente 4 mM MgCl₂, 34 mM fosfato di sodio, 3 mM NaCl, 0,6 mM fosfato di potassio, 1 mM KCl, 1 mM ditiotreitolo, 3% (p/v) glicerolo e 250 μg/mL di albumina di siero bovino. L'attività specifica di [³³P]ATP utilizzata nel saggio è di 100 Ci/mmol. Dopo 5 min, le reazioni chinasiche vengono interrotte con l'aggiunta di 2× tampone campione di Laemmli e trattate termicamente a 90 ℃ per 1 min. I campioni vengono quindi caricati su gel NuPAGE 10% BisTris. Dopo il completamento della SDS-PAGE, i gel vengono essiccati su un essiccatore per gel a lastra. Le bande vengono quindi rilevate utilizzando un PhosphorImager 445Si e la radioattività viene quantificata utilizzando il software ImageQuant. In queste condizioni, il grado di fosforilazione di GST-IκBα è lineare con il tempo e la concentrazione dell'enzima.

• Linee cellulari

  Metastatic human melanoma cells SK-MEL-5

• Concentrazioni

  ~10 μM

• Tempo di incubazione

  3 days

• Metodo

  1×10⁵ cells per well are plated in six-well plates with 10% fetal bovine serum medium overnight to allow cell adhesion. Cells ae cultured in medium containing BMS-345541 for 72 hours of treatment. Cells are counted with a hemocytometer.

• Modelli animali

  Human melanoma xenografts SK-MEL-5

• Dosaggi

  75 mg/kg

• Somministrazione

  orally administered by gavage