Bleomycin sulfate

UT-SCC-12A e UT-SCC-12B sono entrambe più resistenti al Bleomycin sulfate con IC50 di 14,2 nM e 13 nM, rispettivamente. [1] I macrofagi alveolari incubati con 0,01 μg/mL a 1 μg/mL di questo composto per 18 ore secernono significativamente più fattore di crescita dei fibroblasti rispetto ai macrofagi incubati senza questa sostanza chimica. I macrofagi stimolati con questo composto continuano a produrre quantità significative di fattore di crescita dei fibroblasti anche dopo che questa sostanza chimica viene rimossa e sostituita con un terreno fresco (privo di Bleomycin sulfate). La secrezione del fattore di crescita dei fibroblasti da parte dei macrofagi alveolari stimolati da questo composto è inibita dalla cicloesimide e dagli inibitori della 5-lipossigenasi NDGA (acido nordidroguaiaretico) e BW755c, indicando non solo un requisito per la sintesi proteica ma anche per i metaboliti della via della 5-lipossigenasi del metabolismo dell'acido arachidonico per la piena espressione dell'attività. [2] L'incubazione di questa sostanza chimica (400 µg/mL) per 24 ore diminuisce la vitalità delle cellule NTera-2 e aumenta le attività della caspasi-3, -8 e -9, i livelli di Bax e citocromo c citoplasmatico e diminuisce i livelli di Bcl-2. [3] In termini di aberrazioni instabili, l'effetto clastogeno di questo composto sulle cellule ADIPO-P2 persiste per almeno 10 giorni dopo l'esposizione. L'instabilità telomerica indotta da questa sostanza chimica nelle cellule di mammifero persiste per diverse generazioni dopo l'esposizione. Inoltre, la comparsa di fusioni telomeriche nelle cellule esposte a questo composto 10 giorni dopo il trattamento suggerisce che questa sostanza chimica può indurre un'instabilità telomerica ritardata. [4]

Al giorno 7 post-Bleomycin sulfate, le cellule CD45+ nel BALf nei NOX-/- sono 1,7 volte > WT, il 57% delle quali sono Mf che diminuiscono del 67% nei WT e dell'83% nei NOX-/- entro il giorno 21. [5]

• Linee cellulari

  ADIPO-P2 cells

• Concentrazioni

  2.5 μg/mL

• Tempo di incubazione

  30 minutes

• Metodo

  ADIPO-P2 cells are grown in D-MEM high glucose medium supplemented with 20% fetal calf serum, penicillin (100 U/mL) and streptomycin (100 μg/mL) at 37 °C and 5% CO₂ atmosphere. Cells are cultured as monolayer in TC25 Corning flasks containing 1.5 × 10⁵ cells/mL. For each experiment, two flasks are set up, one for the control and one for the treated culture. During the log phase of growth ADIPO-P2 cells are treated with a 30 minutes pulse of 2.5 μg/mL of Bleomycin sulfate. Control cultures are set up in parallel but not exposed to this compound. Time of exposure and concentration of this chemical are chosen according to previous studies carried out in our laboratory with mammalian cells exposed to it. At the end of the pulse treatment with this compound, the cells are washed twice with Hank's balanced salt solution and kept in culture with fresh culture medium until harvesting. Cells are continuously maintained in culture during 5 passages or subcultures after treatment. Subcultivation is carried out whenever the cultures became confluent (approximately 4 × 10⁵ cells/mL of culture medium). To estimate cell growth, at the time of subcultivation cells are collected by trypsinization, an aliquot of about 200 μL stained with 0.4% trypan blue, and the number of viable cells is determined. Cells are then suspended in fresh culture medium and dispensed into new culture flasks containing 1 × 10⁵ cells/mL to continue growing. The rest of the cells is discarded or dispensed in another flask for cytogenetic analysis, which is performed at 18 hours and 10 days after the end of treatments. To analyze chromosomal aberrations, colchicine (0.1 μg/mL) is added to cell cultures during the last 3 hours of culture. Chromosome preparations are made following standard procedures. After harvesting, cells are hypotonically shocked, fixed in methanol:acetic acid (3:1), spread onto glass slides and processed for PNA-FISH. Two independent experiments are carried out.

• Modelli animali

  CD-1 mice

• Dosaggi

  5 mg/kg, 2 ml/kg

• Somministrazione

  Administered via i.t.