In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
Beta-Lapachone (β-Lapachone, ARQ-501) è un inibitore selettivo della DNA topoisomerase I, che non mostra attività inibitorie contro la DNA topoisomerase II o la ligasi. Fase 2.
Target
Topo I
IDO1
0.44 μM
In vitro
Beta-Lapachone inibisce il rilassamento del DNA indotto dalla DNA topoisomerase I in modo dose-dipendente. Il trattamento di questo composto (100 nM o superiore) si traduce in una inibizione >95% dell'attività di svolgimento del DNA della Topo I rispetto al controllo DMSO. Questa sostanza chimica (1-5 μM) provoca un blocco in G0/G1 del ciclo cellulare e induce l'apoptosi bloccando la Topo I sul DNA e bloccando il movimento della forcella di replicazione nelle cellule HL-60 e in tre cellule di cancro alla prostata umano (DU-145, PC-3 e LNCaP). Facilita la migrazione dei fibroblasti murini 3T3 e delle cellule endoteliali umane EAhy926 attraverso diverse vie di segnalazione MAPK, accelerando così la guarigione delle ferite da raschiamento in vitro. Inoltre, questo composto inibisce l'attività ricombinante purificata di IDO1 attraverso un'inibizione non competitiva con IC50 di 0,44 μM, e mostra anche una superiore ritenzione dell'attività inibitoria intracellulare di IDO1 con una IC50 di 1,0 μM, parzialmente dipendente dalla biotrasformazione da parte di NQO1. Questa sostanza chimica induce la necrosi programmata delle cellule tumorali NQO1+ attraverso la formazione di specie reattive dell'ossigeno (ROS) dipendente da NQO1 e l'iperattivazione di PARP1. [5]
In vivo
Il trattamento con Beta-Lapachone (50 mg/kg) porta a una potente inibizione della crescita tumorale in vivo in un modello murino di xenotrapianto di cancro ovarico umano, e la combinazione di questo composto e taxol produce un'induzione sinergica dell'apoptosi. In topi normali e diabetici (db/db), il trattamento con questa sostanza chimica si traduce in un processo di guarigione più rapido rispetto al solo veicolo.
Protocollo (da riferimento)
Saggio della chinasi:
Saggio di attività catalitica della Topoisomerase I
Saggio di attività catalitica della Topoisomerase I: L'attività enzimatica viene analizzata mediante il saggio di svolgimento del DNA. La DNA topoisomerase I, da TopoGEN (1 unità, definita come la quantità di enzima che converte 0,5 μg di DNA superelicoide allo stato rilassato in 30 minuti a 37 °C), viene incubata con 0,5 μg di DNA 6x174 RF, in presenza o assenza di Beta-Lapachone, in 20 μL di tampone di rilassamento (50 mM Tris (pH 7,5), 50 mM KCI, 10 mM MgCl2, 0,5 mM ditiotreitolo, 0,5 mM EDTA, 30 μg/mL albumina di siero bovino) per 30 minuti a 37 °C. Le reazioni vengono interrotte aggiungendo 1% SDS e proteinasi K (50 μg/mL). Dopo un'ulteriore incubazione di 1 ora a 37 °C, i prodotti vengono separati mediante elettroforesi in gel di agarosio all'1% in tampone TAE (0,04 M Tris acetato, 0,001 M EDTA). Il gel viene colorato con bromuro di etidio dopo l'elettroforesi. Il negativo fotografico viene scansionato con un sistema di analisi delle immagini NIH.
IC50 calculations for each cell line are determined by DNA amount (IS) and anchorage-dependent colony formation (CF) assays. For the CF assay, cells are seeded at 500 viable cells/well in 6-well plates and incubated overnight, then treated with equal volumes of media containing beta-lapachone at final concentrations ranging from 0.005 to 50 μM in half-log increments (controls were treated with 0.25% DMSO, equivalent to the highest dose of this compound used) for 4 hour or for continuous 12-hour exposures. Plates (3 wells/condition) are stained with crystal violet, and colonies of >50 normal-appearing cells are enumerated. IC50 values for various cells are calculated using drug doses with numbers of colonies surrounding 50% of control. For DNA assays, plates are harvested for IC50 determinations 8 days after treatment using a CytoFluor 2350 fluorescence measurement system. Six-well samplings are included in the calculation of DNA fluor units for each dose. A graph of this chemical dose versus percentage control DNA in fluor units is used to calculate each IC50. All experiments are repeated at least twice, each in duplicate.
High‑throughput screening identification of a small‑molecule compound that induces ferroptosis and attenuates the invasion and migration of hepatocellular carcinoma cells by targeting the STAT3/GPX4 axis
[ Int J Oncol, 2023, 62(3)42]
Potential drug discovery for COVID-19 treatment targeting Cathepsin L using a deep learning-based strategy
[ Comput Struct Biotechnol J, 2022, 20:2442-2454]
Kinetics of γH2AX and phospho-histone H3 following pulse treatment of TK6 cells provides insights into clastogenic activity
[ Mutagenesis, 2021, geab014]
Nitazoxanide, an anti-parasitic drug, efficiently ameliorates learning and memory impairments in AD model mice.
[ Acta Pharmacol Sin, 2019, 10.1038/s41401-019-0220-1]
Predictions of genotoxic potential, mode of action, molecular targets, and potency via a tiered multiflow® assay data analysis strategy
[ Environ Mol Mutagen, 2019, 60(6):513-533]
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