KD025 (Belumosudil)

Belumosudil (KD025) riduce la secrezione di IL-17 e IL-21 nelle PBMC umane e porta alla riduzione della fosforilazione di STAT3, dell'espressione di IRF4 e RORγt nelle cellule T CD4+. [2]

Inibisce anche la secrezione di IL-21, IL-17 e IFNγ insieme alla diminuzione di STAT3 fosforilato e alla ridotta espressione proteica di IRF4 e BCL6 nelle cellule mononucleate del sangue periferico umano. [3]

Belumosudil (KD025) (200 mg/kg, p.o.) inibisce l'attività di ROCK nel cervello e nel cuore, misurata dal grado di fosforilazione di MYPT1. Riduce significativamente l'area del difetto di perfusione e la perdita di tessuto nell'emisfero ipsilaterale. [1]

In un modello murino di artrite indotta da collagene (CIA), questo composto (200 mg/kg, i.p.) riduce la progressione dell'artrite indotta da collagene tramite il targeting della via mediata dai Th17. [2]

Esso (150 mg/kg, i.p. o p.o.) migliora efficacemente la GVHD cronica in un modello di disadattamento MHC completo di GVHD cronica multisistemica con sindrome da bronchiolite obliterante e un modello di disadattamento MHC minore di GVHD sclerodermiforme. [3]

• Saggi di ROCK1 e ROCK2 ricombinanti

  Le diluizioni e le reazioni del composto Belumosudil (KD025) vengono eseguite in piastre a 96 pozzetti in polistirene a basso legame. La filtrazione viene eseguita in piastre filtranti a 96 pozzetti contenenti membrane scambiatrici di cationi fosfo-cellulosa idrofile. L'attività enzimatica delle ROCK1 e ROCK2 ricombinanti viene misurata radiometricamente in 50 μL di miscela di reazione contenente tampone di saggio (50 mmol/L Tris, pH 7,5, 0,1 mmol/L acido etilenglicoltetraacetico, 10 mmol/L acetato di magnesio e 1 mmol/L ditiotreitolo). La reazione viene incubata per 45 minuti a temperatura ambiente e interrotta con 25 μL di acido fosforico al 3%. Il peptide S6 lungo fosforilato viene separato dall'ATP [[gamma]-³³P] non reagito mediante filtrazione del contenuto della reazione spenta attraverso una piastra filtrante di fosfocellulosa P30. Ogni filtro viene lavato tre volte con 75 μL di acido fosforico 75 mmol/L e una volta con 30 μL di metanolo al 100%. Le piastre filtranti vengono lasciate asciugare e 30 μL di liquido di scintillazione OptiPhase 'SuperMix' vengono aggiunti a ciascun pozzetto. Il ³³fosforo viene quantificato in un contatore di scintillazione I450 MicroBeta e corretto sottraendo la radioattività associata ai campioni di fondo. I dati vengono analizzati ed espressi come percentuale di inibizione utilizzando la formula ((U - B)/(C - B)) × 100 dove U è il valore sconosciuto, B è la media dei pozzetti di fondo di staurosporina e C è la media dei pozzetti di controllo. L'adattamento della curva viene eseguito con il software GraphPad Prism utilizzando un'analisi di tipo equazione dose-risposta sigmoide (pendenza variabile) per generare i valori di IC50. I valori di Ki vengono calcolati da un'equazione di Ki = IC50/(1 + [S]/Km)), dove [S] e Km sono rispettivamente la concentrazione di ATP e il valore Km dell'ATP.

• Linee cellulari

  A7r5 cells

• Concentrazioni

  10 µM

• Tempo di incubazione

  2 h

• Metodo

  Cells were treated with Belumosudil (KD025) for 2 hours.

• Modelli animali

  Young adult, aged, or type 2 diabetic mice

• Dosaggi

  300 mg/kg

• Somministrazione

  p.o.