Copanlisib (BAY 80-6946)

Sia nelle cellule KPL4 che nelle cellule PC3 stimolate con LPA, BAY 80-6946 riduce i livelli di pAKT. In un sottogruppo di linee cellulari di cancro umano con mutazioni PIK3CA e/o sovraespressione di HER2, BAY 80-6946 mostra attività antiproliferativa e induce apoptosi. [1] La combinazione di terapie mirate a HER2 e BAY 80-6946 inibisce la crescita più efficacemente rispetto a ciascuna terapia usata da sola, e può ripristinare la sensibilità a trastuzumab e lapatinib nelle cellule. [2]

Nel modello di xenotrapianto tumorale di ratto KPL4 o HCT116, BAY 80-6946 (6 mg/kg, i.v.) induce una regressione tumorale completa al 100%. Nei topi nudi con modelli di NSCLC resistenti all'erlotinib derivati da pazienti Lu7860 e modelli di tumore mammario luminale derivati da pazienti MAXF1398, BAY 80-6946 (14 mg/kg, i.v.) provoca anche l'inibizione della crescita tumorale. [1]

• Saggi biochimici di lipid chinasi

  L'effetto di BAY 80-6946 sull'attività di PI3Kα, PI3Kβ e PI3Kγ viene misurato dall'inibizione dell'incorporazione di ³³P nel fosfatidilinositolo (PI) in piastre MaxiSorp® a 384 pozzetti rivestite con 2 µg/pozzetto di PI e fosfatidilserina (PS) (rapporto molare 1:1). In ogni saggio di isoforma di PI3K, vengono utilizzati 9 µL di tampone di reazione (50 mM MOPSO, pH 7.0, 100 mM NaCl, 4 mM MgCl₂, 0,1% BSA) contenente 7.5 ng di proteina p110α o p110β tronca N-terminale His-taggata, o 25 ng di proteina p110γ umana purificata. La reazione viene avviata aggiungendo 5 µL di una soluzione di ATP 40 µM contenente 20 µCi/mL [³³P]-ATP. Dopo 2 ore di incubazione a temperatura ambiente, la reazione viene terminata con l'aggiunta di 5 µL di una soluzione di EDTA 25 mM. Le piastre vengono lavate e quindi vengono aggiunti 25 µL di cocktail di scintillazione Ultima Gold™. La radioattività incorporata nel substrato di PI immobilizzato viene determinata con un contatore a scintillazione liquida BetaPlate.

• Linee cellulari

  A series of cancer cell lines

• Concentrazioni

  ~5 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Cell proliferation over a 72-hour period is determined using the CellTiter-Glo® luminescent cell viability kit. Briefly, cells are plated in separate microtiter plates. Following an overnight incubation at 37ºC, luminescence values in the t=0 hour plates are determined. Test compounds diluted in growth medium are added to the t=72 hour plates, and the cells are then incubated for 72 hours at 37ºC. Luminescence values are determined with a Wallac 1420 Victor2™ 1420 multilabel HTS counter after a 10-minute reaction with CellTiter-Glo® solution. The percentage inhibition of cell growth is calculated by subtracting the luminescence values in the t=0 hour plates from the corresponding values in the t=72 hour plates. Differences in values between drug-treated cells and controls are used to determine the percentage inhibition of cell growth.

• Modelli animali

  Rats bearing KPL4 or HCT116 xenografts

• Dosaggi

  6 mg/kg

• Somministrazione

  i.v.