Bardoxolone Methyl (RTA 402)

Il Bardoxolone Methyl mostra potenti attività inibitorie contro la produzione di ossido nitrico indotta dall'interferone-Ƴ nei macrofagi di topo con un IC50 di 0,1 nM. [1] Questo composto diminuisce la vitalità delle cellule leucemiche HL-60, KG-1 e NB4 con IC50 di 0,4, 0,4 e 0,27 μM, rispettivamente. Induce la proteina pro-apoptotica Bax, inibisce l'attivazione di ERK1/2 e blocca la fosforilazione di Bcl-2, il che contribuisce all'induzione dell'apoptosi. [2] Questa sostanza chimica inibisce potentemente sia la NF-kappaB costitutiva che quella inducibile attivata da TNF, interleuchina (IL)-1beta, estere di forbolo, acido okadaico, perossido di idrogeno, lipopolisaccaride e fumo di sigaretta. [3]

Il Bardoxolone Methyl (60 mg/kg) riduce il numero, le dimensioni e la gravità dei tumori polmonari in vivo. [4] Questo composto riduce significativamente la risposta infiammatoria delle citochine in vivo dopo la stimolazione con LPS, induce l'espressione della proteina HO-1 nella milza e protegge i topi da una dose letale di LPS. [5]

• Saggio IKK

  Per determinare l'effetto di CDDO-Me sull'attivazione di IKK indotta da TNF, si analizza l'IKK. In breve, il complesso IKK dagli estratti di cellule intere è stato precipitato con un anticorpo contro IKKα e IKKβ e quindi trattato con perline di proteina A/G-Sepharose. Dopo 2 ore, le perline vengono lavate con tampone di lisi e quindi risospese in una miscela di saggio della chinasi contenente 50 mmol/L HEPES (pH 7,4), 20 mmol/L MgCl₂, 2 mmol/L DTT, 20 μCi [γ-³²P]ATP, 10 μmol/L ATP non marcato e 2 μg del substrato glutatione S-transferasi-IκBα (amminoacidi 1-54). Dopo incubazione a 30°C per 30 minuti, la reazione viene terminata per ebollizione con tampone di campionamento SDS per 5 minuti. Infine, la proteina viene risolta su SDS-PAGE al 10%, il gel viene essiccato e le bande radioattive vengono visualizzate con uno Storm820. Per determinare le quantità totali di IKK-α e IKK-β in ciascun campione, 50 μg di proteine di cellule intere vengono risolte su SDS-PAGE al 7,5%, elettrotrasferite su una membrana di nitrocellulosa e quindi blottate con anticorpo anti-IKK-α o anti-IKK-β.

• Linee cellulari

  HL-60, KG-1, and NB4 cells

• Concentrazioni

  ~5 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Leukemic cell lines are cultured at a density of 3.0 × 10⁵ cells/mL, and AML mononuclear cells are cultured at 5 × 10⁵ cells/mL in the presence or absence of indicated concentrations of this compound. Appropriate amounts of DMSO (final concentration less than 0.05%) are included as control. For cytotoxicity studies, 1 μM ara-C is added to the cultures. After 24 to 72 hours, viable cells are counted with the trypan blue dye exclusion method using a hematocytometer.

• Modelli animali

  Female A/J mice are injected i.p. with vinyl carbamate.

• Dosaggi

  ~60 mg/kg

• Somministrazione

  Oral gavage