AZD6482

N. catalogoS1462 Lotto:S146201

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Dati tecnici

Formula

C₂₂H₂₄N₄O₄

Peso molecolare

408.45

Numero CAS

1173900-33-8

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

82 mg/mL (200.75 mM)

Ethanol

10 mg/mL (24.48 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

AZD6482 (KIN-193) è un inibitore di PI3Kβ con un IC50 di 10 nM, 8, 87 e 109 volte più selettivo per PI3Kβ rispetto a PI3Kδ, PI3Kα e PI3Kγ in saggi senza cellule. Fase 1.

Target

PI3Kβ (Cell-free assay)	PI3Kδ (Cell-free assay)	DNA-PK (Cell-free assay)	PI3Kα (Cell-free assay)
10 nM	80 nM	420 nM	870 nM

In vitro

AZD6482 inibisce anche PI3Kα, γ e δ, con IC50 da 80 nM a 1,09 μM, che sono significativamente inferiori rispetto al suo enantiomero (+)- (forma S). Questo composto è un agente antiaggregante piastrinico; blocca l'attivazione/aggregazione piastrinica e promuove la disaggregazione piastrinica in un saggio di aggregazione piastrinica lavata (WPA), con un valore IC50 di 6 nM. Inoltre, mirando a PI3Kβ, questa sostanza chimica inibisce specificamente la trombosi senza interferire con la normale emostasi. Pertanto, è usato come farmaco antitrombotico per la profilassi dei disturbi trombotici.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[1]}	Saggio di inibizione dell'enzima PI3K L'inibizione di PI3Kβ, PI3Kα, PI3Kγ e PI3Kδ viene valutata in un saggio di attività enzimatica basato su AlphaScreen utilizzando enzimi ricombinanti umani. Il saggio misura la conversione di PIP2 in PIP3 mediata da PI3K. Il PIP3 biotinilato, un dominio di omologia di pleckstrina (PH) marcato con GST e le due microsfere AlphaScreen formano un complesso che emette un segnale all'eccitazione laser a 680 nm. Il PIP3 formato nella reazione enzimatica compete con il PIP3 biotinilato per il legame al dominio PH, riducendo così il segnale con l'aumento del prodotto enzimatico. Questo composto è disciolto in DMSO e aggiunto a piastre a 384 pozzetti. PBKβ, PBKα, PBKγ o PBKδ viene aggiunto in un tampone Tris (50 mM Tris pH 7,6, 0,05% CHAPS, 5 mM DTT e 24 mM MgCl₂) e lasciato pre-incubare con questa sostanza chimica per 20 minuti prima dell'aggiunta della soluzione di substrato contenente PIP2 e ATP. La reazione enzimatica viene interrotta dopo 20 minuti dall'aggiunta di una soluzione di arresto contenente EDTA e biotina-PIP3, seguita dall'aggiunta di una soluzione di rilevazione contenente GST-grpl PH e microsfere AlphaScreen. Le piastre vengono lasciate per un minimo di 5 ore al buio prima dell'analisi. Le concentrazioni finali di DMSO, ATP e PIP2 nel saggio sono, rispettivamente, 0,8%, 4 μM e 40 μM. I valori di IC50 sono calcolati secondo l'equazione, y = {a+[(b-a)/(l+(x/IC50)^s)]}, dove y = % di inibizione; a = 0%; b = 100%; s = la pendenza della curva dose-risposta; x = la concentrazione di questo composto.
Saggio cellulare:^{^[1]}	Linee cellulari Human platelet pellet Concentrazioni 0–60 nM, dissolved in DMSO Tempo di incubazione 5 min Metodo For assay of washed platelet aggregation (WPA), the platelet pellets are isolated from human blood and re-suspended to 2 × 10¹⁵/L in Tyrodes buffer (TB) containing 1 μM hirudin and 0.02 U/mL apyrase. Then, the platelet suspension is left to rest at room temperature for 30 min. Just prior to time for assay, CaCl₂ is added to a final concentration of 2 mM. AZD6482, dissolved in DMSO, is added to a 96-well plate prior to the addition of the washed platelet suspension. The platelet suspension is preincubated with this compound for 5 min. Light absorption at 650 nm is recorded before and after a 5 min plate shake and referred to as recording 0 (R0) and Rl. A mouse anti-human CD9 antibody is added (at a donor specific concentration) to each well prior to next 10 min plate shake and light absorption recording; R2. For data analysis, light absorbance in wells with TB are subtracted from all readings before percent aggregation is calculated according the formula: [(R1-R2)/R1] × 100 = % aggregation. Spontaneous aggregation or pro-aggregatory effect of the inhibitor is evaluated by the same formula, [(R0-Rl)/R0] × 100 = % aggregation. IC50 values are calculated according to the equation, y = {a+[(b-a)/(l+(x/IC50)^s)]}, where y = % inhibition; a = 0%; b = 100%; s = the slope of the concentration-response curve; x = this chemical concentration.

Saggio della chinasi:^{^[1]}

Saggio di inibizione dell'enzima PI3K
L'inibizione di PI3Kβ, PI3Kα, PI3Kγ e PI3Kδ viene valutata in un saggio di attività enzimatica basato su AlphaScreen utilizzando enzimi ricombinanti umani. Il saggio misura la conversione di PIP2 in PIP3 mediata da PI3K. Il PIP3 biotinilato, un dominio di omologia di pleckstrina (PH) marcato con GST e le due microsfere AlphaScreen formano un complesso che emette un segnale all'eccitazione laser a 680 nm. Il PIP3 formato nella reazione enzimatica compete con il PIP3 biotinilato per il legame al dominio PH, riducendo così il segnale con l'aumento del prodotto enzimatico. Questo composto è disciolto in DMSO e aggiunto a piastre a 384 pozzetti. PBKβ, PBKα, PBKγ o PBKδ viene aggiunto in un tampone Tris (50 mM Tris pH 7,6, 0,05% CHAPS, 5 mM DTT e 24 mM MgCl₂) e lasciato pre-incubare con questa sostanza chimica per 20 minuti prima dell'aggiunta della soluzione di substrato contenente PIP2 e ATP. La reazione enzimatica viene interrotta dopo 20 minuti dall'aggiunta di una soluzione di arresto contenente EDTA e biotina-PIP3, seguita dall'aggiunta di una soluzione di rilevazione contenente GST-grpl PH e microsfere AlphaScreen. Le piastre vengono lasciate per un minimo di 5 ore al buio prima dell'analisi. Le concentrazioni finali di DMSO, ATP e PIP2 nel saggio sono, rispettivamente, 0,8%, 4 μM e 40 μM. I valori di IC50 sono calcolati secondo l'equazione, y = {a+[(b-a)/(l+(x/IC50)^s)]}, dove y = % di inibizione; a = 0%; b = 100%; s = la pendenza della curva dose-risposta; x = la concentrazione di questo composto.

Saggio cellulare:^{^[1]}

Linee cellulari
Human platelet pellet
Concentrazioni
0–60 nM, dissolved in DMSO
Tempo di incubazione
5 min
Metodo
For assay of washed platelet aggregation (WPA), the platelet pellets are isolated from human blood and re-suspended to 2 × 10¹⁵/L in Tyrodes buffer (TB) containing 1 μM hirudin and 0.02 U/mL apyrase. Then, the platelet suspension is left to rest at room temperature for 30 min. Just prior to time for assay, CaCl₂ is added to a final concentration of 2 mM. AZD6482, dissolved in DMSO, is added to a 96-well plate prior to the addition of the washed platelet suspension. The platelet suspension is preincubated with this compound for 5 min. Light absorption at 650 nm is recorded before and after a 5 min plate shake and referred to as recording 0 (R0) and Rl. A mouse anti-human CD9 antibody is added (at a donor specific concentration) to each well prior to next 10 min plate shake and light absorption recording; R2. For data analysis, light absorbance in wells with TB are subtracted from all readings before percent aggregation is calculated according the formula: [(R1-R2)/R1] × 100 = % aggregation. Spontaneous aggregation or pro-aggregatory effect of the inhibitor is evaluated by the same formula, [(R0-Rl)/R0] × 100 = % aggregation. IC50 values are calculated according to the equation, y = {a+[(b-a)/(l+(x/IC50)^s)]}, where y = % inhibition; a = 0%; b = 100%; s = the slope of the concentration-response curve; x = this chemical concentration.

Riferimenti

http://www.wipo.int/patentscope/search/en/WO2009093972

Convalida del prodotto da parte del cliente

: , , Mol Cancer Res, 2017, 15(6):765-775

: , , One customer

: , , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

: Dati da [ , , Oncotarget, 2016, 7(34):54897-54912 ]

Sellecks AZD6482 È stato citato da 27 Pubblicazioni

Human colonic organoids for understanding early events of familial adenomatous polyposis pathogenesis [ J Pathol, 2025, 265(1):26-40]	PubMed: 39641466
Longitudinal phosphoproteomics reveals the PI3K-PAK1 axis as a potential target for recurrent colorectal liver metastases [ Cell Rep, 2024, 43(12):115061]	PubMed: 39689713
Molecular mechanisms of PI3K isoform dependence in embryonic growth [ J Turk Ger Gynecol Assoc, 2024, 25(3):159-166]	PubMed: 39219229
A Gene Co-Expression Network-Based Drug Repositioning Approach Identifies Candidates for Treatment of Hepatocellular Carcinoma [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1573]	PubMed: 35326724
ZAP70 Activation Compensates for Loss of Class IA PI3K Isoforms Through Activation of the JAK-STAT3 Pathway [ Cancer Diagn Progn, 2022, 2(3):391-404]	PubMed: 35530641
Synergism between the phosphatidylinositol 3-kinase p110β isoform inhibitor AZD6482 and the mixed lineage kinase 3 inhibitor URMC-099 on the blockade of glioblastoma cell motility and focal adhesion formation [ Cancer Cell Int, 2021, 21(1):24]	PubMed: 33407478
Metabolic Imaging Detects Resistance to PI3Kα Inhibition Mediated by Persistent FOXM1 Expression in ER+ Breast Cancer [ Cancer Cell, 2020, S1535-6108(20)30427-X]	PubMed: 32976773
PIK3CA C-terminal frameshift mutations are novel oncogenic events that sensitize tumors to PI3K-α inhibition [ Proc Natl Acad Sci U S A, 2020, 117(39):24427-24433]	PubMed: 32929011
Targeting phosphatidylinositol 3 kinase-β and -δ for Bruton tyrosine kinase resistance in diffuse large B-cell lymphoma [ Blood Adv, 2020, 4(18):4382-4392]	PubMed: 32926124
Application of a Biphasic Mathematical Model of Cancer Cell Drug Response for Formulating Potent and Synergistic Targeted Drug Combinations to Triple Negative Breast Cancer Cells. [ Cancers (Basel), 2020, 27;12(5)pii: E1087]	PubMed: 32349331

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