AZD4547 (Fexagratinib)

Rispetto a FGFR1-3, AZD4547 mostra un'attività più debole contro FGFR4 con un IC50 di 165 nM. AZD4547 inibisce l'attività chinasica di VEGFR2 (KDR) ricombinante solo con un IC50 di 24 nM, nel test di selettività in vitro contro un panel diversificato di chinasi umane rappresentative. AZD4547 a 0,1 μM non mostra attività contro una serie di chinasi ricombinanti tra cui ALK, CHK1, EGFR, MAPK1, MEK1, p70S6K, PDGFR, PKB, Src, Tie2 e PI3-chinasi. Coerentemente, la potente selettività di AZD4547 per FGFR1-3 rispetto a FGFR4, IGFR e KDR è osservata anche nei saggi di fosforilazione cellulare. AZD4547 ha una potente attività antiproliferativa in vitro solo contro linee cellulari tumorali che esprimono FGFR deregolati come KG1a, Sum52-PE e KMS11 con IC50 di 18-281 nM, ed è inattivo contro MCF7 e più di 100 linee cellulari tumorali aggiuntive. Il trattamento con AZD4547 inibisce potentemente la fosforilazione di FGFR e MAPK nelle linee cellulari tumorali umane in modo dose-dipendente. AZD4547 inibisce anche potentemente la fosforilazione di FRS2 e PLCγ, marcatori a valle della segnalazione di FGFR. In particolare, AZD4547 influenza la fosforilazione di AKT nelle linee cellulari mammarie, MCF7 e Sum52-PE, ma non nelle linee KG1a e KMS11. Il trattamento con AZD4547 induce significativamente l'apoptosi nelle cellule Sum52-PE e KMS11, aumenta drasticamente l'arresto in G1 ma non l'apoptosi nelle cellule KG1a, e non ha alcun effetto sulla distribuzione del ciclo cellulare o sull'apoptosi nelle cellule MCF7. [1]

La somministrazione orale di AZD4547 a 3 mg/kg due volte al giorno in topi portatori di tumori KMS11 si traduce in una significativa inibizione della crescita tumorale del 53% rispetto ai controlli trattati con veicolo, e AZD4547 a 12,5 mg/kg una volta al giorno o 6,25 mg/kg due volte al giorno porta a una completa stasi tumorale, che è associata a una modulazione farmacodinamica dose-proporzionale di phospho-FGFR3 e a una ridotta proliferazione delle cellule tumorali KMS11. Inoltre, la somministrazione orale di AZD4547 a 12,5 mg/kg una volta al giorno si traduce in un'inibizione della crescita tumorale del 65% nel modello di xenotrapianto KG1a con fusione di FGFR1. A dosi efficaci, AZD4547 non mostra effetti antiangiogenici. AZD4547 non ha effetti significativi sulla pressione sanguigna e quindi manca di attività anti-KDR in vivo. Coerentemente, la somministrazione orale di 6,25 mg/kg di AZD4547 due volte al giorno è inattiva nei modelli di xenotrapianto sensibili al cediranib, inclusi Calu-6, HCT-15 e LoVo. [1]

• Attività chinasica di AZD4547

  La capacità di AZD4547 di inibire le attività chinasiche ricombinanti umane di FGFR1-3 viene testata utilizzando concentrazioni di ATP pari o appena inferiori ai rispettivi K_m.

• Linee cellulari

  KG1a, Sum52-PE, KMS11, and MCF7

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Tempo di incubazione

  72 hours

• Metodo

  Cells are exposed to various concentrations of AZD4547 for 72 hours. The antiproliferative IC50 values are obtained by MTS proliferation assay. For fluorescence-activated cell sorting (FACS), cells are fixed with 70% ethanol and then incubated with propidium iodide/RNase A labeling solution. Cell cycle profiles are assessed with a FACSCalibur instrument and CellQuest analysis software. For apoptotic analysis, cells and media are gently harvested and centrifuged, followed by washing of cell pellets. Cells are then processed for Annexin V isothiocyanate (FITC) staining and propidium iodide uptake. The proportion of cells staining positive for Annexin V are then assessed with a FACSCalibur instrument and quadrant sorting is done by CellQuest analysis software.

• Modelli animali

  Female swiss derived nude (nu/nu) and severe combined immunodeficient mice (SCID) injected s.c. with LoVo, HCT-15, Calu-6, KMS11 or KG1a

• Dosaggi

  1.5-50 mg/kg

• Somministrazione

  Oral gavage once daily or twice daily