In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
Zorifertinib (AZD3759) è un potente inibitore di EGFR, attivo per via orale e penetrante nel SNC, con valori di IC50 di 0,3 nM, 0,2 nM e 0,2 nM per EGFR (WT), EGFR (L858R) e EGFR (esone 19Del), rispettivamente. Questo composto è in Fase 1.
Target
EGFR (L858R) (Cell-free assay)
EGFR (exon 19Del) (Cell-free assay)
EGFR (WT) (Cell-free assay)
0.2 nM
0.2 nM
0.3 nM
In vitro
Nelle cellule H3255 (L858R), Zorifertinib (AZD3759) inibisce la fosforilazione dell'EGFR con un IC50 di 7,2 nM. Questo composto ha mostrato un effetto inibitorio sulla via pEGFR e sulla proliferazione delle cellule PC-9 e H3255 derivate dalla mutazione dell'EGFR con IC50 di 7,7 nM e 7 nM rispettivamente, ma nessuna attività significativa contro la proliferazione delle cellule H838.
In vivo
Zorifertinib (AZD3759) mostra una buona biodisponibilità orale nei cani e penetra estensivamente nel cervello delle scimmie. In un modello di metastasi cerebrale PC-9 (Exon19Del), questo composto (15 mg/kg) causa una significativa efficacia antitumorale dose-dipendente.
Determinazione dell'IC50 dei composti contro gli enzimi EGFR
La potenza di inibizione di Zorifertinib (AZD3759) contro gli enzimi EGFR WT e mutanti viene valutata utilizzando l'approccio di fluorescenza risolta nel tempo omogenea CisBio (HTRF, Cat No. 62TK0PEJ) secondo le istruzioni del produttore. Le concentrazioni finali di enzima utilizzate in questo saggio sono 0,1 nM, 0,03 nM e 0,026 nM per EGFR wild type, L858R ed Exon19Del, rispettivamente, e vengono applicati 0,8 μM, 4 μM e 25 μM di ATP, corrispondenti ai valori di Km degli enzimi EGFR. In breve, 3 μL di ATP e 2 μM di substrato peptidico TK-biotina vengono incubati in presenza o assenza di composto diluito in serie a temperatura ambiente in piastre di saggio in polistirene bianco Greiner a 384 pozzetti. La reazione viene avviata con l'aggiunta di 3 μL di chinasi che potrebbe fosforilare il peptide substrato, e il tampone di saggio contiene 1 mM DTT, 5 mM MgCl2, 1 mM MnCl2 e 0,01% CHAPS. Dopo 30 minuti di incubazione, la reazione viene interrotta con l'aggiunta di 6 μl di miscela di reagente di rilevazione contenente 250 nM Strep-XL665 e TK Ab Europium Cryptate diluiti in tampone di rilevazione. Le piastre vengono incubate per 1 ora prima che la fluorescenza venga misurata a 615 nm e 665 nm, rispettivamente, con una lunghezza d'onda di eccitazione di 320 nm da un lettore multilabel EnVision di Perkin Elmer utilizzando le impostazioni HTRF standard. Il rapporto segnale calcolato di 665 nm/615 nm è proporzionale all'attività chinasica. La concentrazione di questo composto che produce il 50% di inibizione della rispettiva chinasi (IC50) viene calcolata utilizzando un adattamento logistico a quattro parametri.
PC-9 (exon 19Del), H3255 (L858R) and H838 (wt) cells
Concentrazioni
~30 mM
Tempo di incubazione
72 h
Metodo
Zorifertinib (AZD3759) cell proliferation is determined by MTS methods. Briefly, cells are seeded in 96-well plates (at a density to allow for logarithmic growth during the 72-hour assay) and incubated overnight at 37 °C and 5% CO2. Cells are then exposed to concentrations of this compound ranging from 30 to 0.0003 mM for 72 hours. For the MTS endpoint, cell proliferation is measured by the CellTiter AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay reagent in accordance with the manufacturer’s protocol. Absorbance is measured with a Tecan Ultra instrument. Predose measurements are made, and concentration needed to reduce the growth of treated cells to half that of untreated cells (GI50) values are determined using absorbance readings.
Sellecks Zorifertinib (AZD3759) È stato citato da 6 Pubblicazioni
A Novel Network Pharmacology Strategy Based on the Universal Effectiveness-Common Mechanism of Medical Herbs Uncovers Therapeutic Targets in Traumatic Brain Injury
[ Drug Des Devel Ther, 2024, 18:1175-1188]
Aurora kinase blockade drives de novo addiction of cervical squamous cell carcinoma to druggable EGFR signalling
[ Oncogene, 2022, 10.1038/s41388-022-02256-3]
YH25448, an Irreversible EGFR-TKI with Potent Intracranial Activity in EGFR Mutant Non-Small Cell Lung Cancer
[ Clin Cancer Res, 2019, 25(8):2575-2587]
Brain distribution of a panel of EGFR inhibitors using cassette-dosing in wild-type and Abcb1/Abcg2 deficient mice
[Kim M Drug Metab Dispos, 2019, 10.1124/dmd.118.084210]
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