Spebrutinib (AVL-292)

N. catalogoS7173 Lotto:S717302

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Dati tecnici

Formula

C₂₂H₂₂FN₅O₃

Peso molecolare

423.44

Numero CAS

1202757-89-8

Solubilità (25°C)*

In vitro

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	4.250mg/ml (10.04mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 85 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	0.530mg/ml (1.25mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 10.6 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Attività biologica

Descrizione

Spebrutinib (AVL-292) è un inibitore di BTK covalente, oralmente attivo e altamente selettivo con un IC50 di <0,5 nM, che mostra una selettività almeno 1400 volte superiore rispetto alle altre chinasi analizzate. È in Fase 1.

Target

BTK
(Cell-free assay)

<0.5 nM

In vitro

Spebrutinib (AVL-292) esibisce un'inibizione dose-dipendente di Btk con EC50 di 8 nM e dei componenti di segnalazione a valle del BCR nelle cellule Ramos. Inibendo le attività di BTK, inibisce ulteriormente la proliferazione delle cellule B con EC50 di 3 nM.

In vivo

In un modello murino di artrite indotta da collagene, Spebrutinib (AVL-292) (3-30 mg/kg, p.o.) inibisce in modo dose-dipendente i segni clinici della malattia infiammatoria, inclusa la riduzione del gonfiore delle articolazioni e delle zampe e l'arrossamento visibile delle zampe colpite.

Caratteristiche

Inibitore selettivo di BTK biodisponibile per via orale che è stato testato in studi clinici di Fase I per il trattamento del B-NHL, della CLL e della WM recidivi o refrattari.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[2]}	Procedure per il saggio BTK OMNIA Il saggio a lettura continua Omnia viene eseguito essenzialmente come descritto dal fornitore. Le condizioni del saggio sono: 40 μM ATP (1X K_MATP), 10 μM Y5-Sox e 10 nM di enzima BTK. In breve, una miscela di substrato contenente 1,13X ATP e il substrato Y5 Sox viene prima preparata in 1X Omnia Kinase Reaction Buffer (KRB) composto da 20 mM Tris, pH 7,5, 5 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 5 mM β-glicerofosfato, 5% glicerolo e 0,2 mM DTT. Per le misurazioni dell'IC50 di Spebrutinib (AVL-292), 5 μL di enzima vengono incubati con composti diluiti in serie (3 volte) preparati in 50% DMSO in una micropiastra Corning (#3574) a 384 pozzetti, bianca, con superficie non legante a 25°C per 30 min. Le reazioni chinasiche vengono avviate con l'aggiunta di 45 μL della miscela ATP/substrato Y5 e monitorate a λex360/λem485 in un lettore di piastre Synergy 4 per 60 minuti. Le curve di progresso di ogni pozzetto vengono esaminate per la cinetica di reazione lineare e le statistiche di adattamento. La velocità iniziale di ogni reazione viene determinata dalla pendenza di un grafico delle unità di fluorescenza relativa rispetto al tempo e quindi tracciata rispetto alla concentrazione dell'inibitore per stimare l'IC50 utilizzando il modello di Risposta, Pendenza Variabile in GraphPad Prism di GraphPad Software.
Saggio cellulare:^{^[2]}	Linee cellulari Human B cells Concentrazioni ~1000 nM Tempo di incubazione 72 hours Metodo A suspension of resting purified naïve human B cells isolated by negative selection in RPMI is prepared at 0.4–0.5 × 10⁶ cells/ml. Cells are mixed together with α-human IgM (final concentration of 5 μg/ml in each well) and vehicle (dimethyl sulfoxide) or Spebrutinib (AVL-292) (final concentrations of 0.01, 0.1, 1.0, 10.0, 100.0, or 1000 nM per well) and seeded in a 96-well plate. This compound is used at the specified concentrations. Cells are incubated for 56 hours in a humidified incubator maintained at 37°C and 5% CO₂. ³H-Thymidine is added (final concentration of 1 μCi in each well) and cells are incubated overnight, harvested, and measured for ³H incorporation. Experiments are performed in triplicate.

Saggio della chinasi:^{^[2]}

Procedure per il saggio BTK OMNIA
Il saggio a lettura continua Omnia viene eseguito essenzialmente come descritto dal fornitore. Le condizioni del saggio sono: 40 μM ATP (1X K_MATP), 10 μM Y5-Sox e 10 nM di enzima BTK. In breve, una miscela di substrato contenente 1,13X ATP e il substrato Y5 Sox viene prima preparata in 1X Omnia Kinase Reaction Buffer (KRB) composto da 20 mM Tris, pH 7,5, 5 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 5 mM β-glicerofosfato, 5% glicerolo e 0,2 mM DTT. Per le misurazioni dell'IC50 di Spebrutinib (AVL-292), 5 μL di enzima vengono incubati con composti diluiti in serie (3 volte) preparati in 50% DMSO in una micropiastra Corning (#3574) a 384 pozzetti, bianca, con superficie non legante a 25°C per 30 min. Le reazioni chinasiche vengono avviate con l'aggiunta di 45 μL della miscela ATP/substrato Y5 e monitorate a λex360/λem485 in un lettore di piastre Synergy 4 per 60 minuti. Le curve di progresso di ogni pozzetto vengono esaminate per la cinetica di reazione lineare e le statistiche di adattamento. La velocità iniziale di ogni reazione viene determinata dalla pendenza di un grafico delle unità di fluorescenza relativa rispetto al tempo e quindi tracciata rispetto alla concentrazione dell'inibitore per stimare l'IC50 utilizzando il modello di Risposta, Pendenza Variabile in GraphPad Prism di GraphPad Software.

Saggio cellulare:^{^[2]}

Linee cellulari
Human B cells
Concentrazioni
~1000 nM
Tempo di incubazione
72 hours
Metodo
A suspension of resting purified naïve human B cells isolated by negative selection in RPMI is prepared at 0.4–0.5 × 10⁶ cells/ml. Cells are mixed together with α-human IgM (final concentration of 5 μg/ml in each well) and vehicle (dimethyl sulfoxide) or Spebrutinib (AVL-292) (final concentrations of 0.01, 0.1, 1.0, 10.0, 100.0, or 1000 nM per well) and seeded in a 96-well plate. This compound is used at the specified concentrations. Cells are incubated for 56 hours in a humidified incubator maintained at 37°C and 5% CO₂. ³H-Thymidine is added (final concentration of 1 μCi in each well) and cells are incubated overnight, harvested, and measured for ³H incorporation. Experiments are performed in triplicate.

Riferimenti

http://www.celgene.com/pdfs/2011_ASH_AVL-292.pdf
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23709115/

Convalida del prodotto da parte del cliente

: , , Allergy, 2017, 72(11):1666-1676

: , , J Biomol Screen, 2015, 20(7):876-886.

Sellecks Spebrutinib (AVL-292) È stato citato da 12 Pubblicazioni

Temporal mapping and pharmacological manipulation of signaling architecture of Tyrosine kinases in Traumatic Brain Injury (TBI) [ oparu, 2023, 10.18725/OPARU-47820]	PubMed: None
Surface-associated antigen induces permeabilization of primary mouse B-cells and lysosome exocytosis facilitating antigen uptake and presentation to T-cells [ Elife, 2021, 10e66984]	PubMed: 34704555
Assessment of the effects of Syk and BTK inhibitors on GPVI-mediated platelet signaling and function [ Am J Physiol Cell Physiol, 2021, 320(5):C902-C915]	PubMed: 33689480
Combining ibrutinib and checkpoint blockade improves CD8+ T-cell function and control of chronic lymphocytic leukemia in Em-TCL1 mice. [ Haematologica, 2020, 10.3324/haematol.2019.238154]	PubMed: 32139435
Differential impact of BTK active site inhibitors on the conformational state of full-length BTK [ Elife, 2020, 9e60470]	PubMed: 33226337
Effects of Inhibitors against Syk-BTK-PI3K Signaling on Platelet Function [ ScholarsArchive@OSU, 2020, 51]	PubMed: N/A
Effects of Inhibitors against Syk-BTK-PI3K Signaling on Platelet Function [ ScholarsArchive@OSU, 2020, None]	PubMed: None
Inhibition of Bruton's Tyrosine Kinase Modulates Microglial Phagocytosis: Therapeutic Implications for Alzheimer's Disease [ J Neuroimmune Pharmacol, 2019, 10.1007/s11481-019-09839-0]	PubMed: 30758770
Improving CLL Vγ9Vδ2-T-cell fitness for cellular therapy by ex vivo activation and ibrutinib [ Blood, 2018, 132(21):2260-2272]	PubMed: 30213872
BTK inhibition is a potent approach to block IgE-mediated histamine release in human basophils. [Smiljkovic D, et al. Allergy, 2017, 10.1111/all.13166]	PubMed: 28328081

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