AT7519 HCl

N. catalogoS7808 Lotto:S780801

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Dati tecnici

Formula

C16H18Cl3N5O2
Peso molecolare 418.71 Numero CAS 902135-91-5
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 52 mg/mL (124.19 mM)
Water 43 mg/mL (102.69 mM)
Ethanol 28 mg/mL (66.87 mM)
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
Saline

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 30.000mg/ml (71.65mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 30 mg of this product to 1 ml of physiological saline (0.9% NaCL solution), mix evenly to make it clear, The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione AT7519 HCl è un inibitore multi-CDK per CDK1, 2, 4, 6 e 9 con IC50 di 10-210 nM in saggi senza cellule. È meno potente verso CDK3 e poco attivo verso CDK7. Fase 2.
Target
CDK9/CyclinT
(Cell-free assay)		 CDK5/p35
(Cell-free assay)		 CDK2/CyclinA
(Cell-free assay)		 GSK-3β
(Cell-free assay)		 CDK4/CyclinD1
(Cell-free assay)		 Visualizza altro
<10 nM 13 nM 47 nM 89 nM 100 nM
In vitro AT7519 è un inibitore di CDK competitivo con ATP con un valore Ki di 38 nM per CDK1. AT7519 è inattivo contro tutte le chinasi non-CDK ad eccezione di GSK3β (IC50 = 89 nM). AT7519 mostra una potente attività antiproliferativa in una varietà di linee cellulari tumorali umane con valori IC50 che vanno da 40 nM per MCF-7 a 940 nM per SW620, coerentemente con l'inibizione di CDK1 e CDK2. AT7519 induce citotossicità dose-dipendente in linee cellulari di mieloma multiplo (MM) con valori IC50 che vanno da 0,5 a 2 μM a 48 ore, con le linee cellulari più sensibili MM.1S (0,5 μM) e U266 (0,5 μM) e la più resistente MM.1R (>2 μM). Non induce citotossicità nelle cellule mononucleate del sangue periferico (PBMNC). AT7519 supera parzialmente il vantaggio proliferativo conferito da IL6 e IGF-1, nonché l'effetto protettivo delle cellule stromali del midollo osseo (BMSCs). AT7519 induce una rapida defosforilazione del CTD della RNA pol II nei siti serina 2 e serina 5 e porta all'inibizione della trascrizione, contribuendo parzialmente alla citotossicità delle cellule MM indotta da AT7519. AT7519 induce l'attivazione di GSK-3β mediante la regolazione negativa della fosforilazione di GSK-3β, che contribuisce anche all'apoptosi indotta da AT7519 indipendentemente dall'inibizione della trascrizione.
In vivo Una somministrazione di AT7519 (9,1 mg/kg) due volte al giorno causa la regressione tumorale di tumori s.c. sia in stadio precoce che avanzato nei modelli di xenotrapianto di cancro al colon HCT116 e HT29. Il trattamento con AT7519 (15 mg/kg) inibisce la crescita tumorale e prolunga la sopravvivenza complessiva mediana dei topi nel modello murino di xenotrapianto di MM umano in associazione con un'aumentata attivazione della caspasi 3.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Saggi chinasici in vitro

    I saggi chinasici per CDK1, CDK2 e GSK3-β sono tutti eseguiti in un formato di legame su filtro radiometrico. I saggi per CDK5 sono in formato DELFIA e per CDK 4 e 6 in formato ELISA. Per CDK1 e 2, la CDK rilevante e 0,12 μg/mL di Istone H1 vengono incubate in 20 mM MOPS, pH 7,2, 25 mM β-glicerofosfato, 5 mM EDTA, 15 mM MgCl2, 1 mM ortovanadato di sodio, 1 mM DTT, 0,1 mg/mL BSA, 45 μM ATP (0,78 Ci/mmol) e diverse concentrazioni di AT7519 rispettivamente per 2 o 4 ore. Per GSK3-β, l'enzima rilevante e 5 μM di peptide di glicogeno sintasi 2 insieme a 10 mM MOPS pH 7,0, 0,1 mg/mL BSA, 0,001% Brij-35, 0,5% glicerolo, 0,2 mM EDTA, 10 mM MgCl2, 0,01% β-mercaptoetanolo, 15 μM ATP (2,31 Ci/mmol) e diverse concentrazioni di AT7519 vengono incubati per 3 ore. Le reazioni del saggio vengono interrotte aggiungendo un eccesso di acido ortofosforico e filtrate utilizzando piastre filtranti Millipore MAPH. Le piastre vengono quindi lavate, aggiunto uno scintillante e la radioattività misurata mediante conteggio a scintillazione su un Packard TopCount. Per CDK5, CDK5/p35 e 1 μM di un peptide Istone H1 biotinilato (Biotin-PKTPKKAKKL) vengono incubati in 25 mM Tris-HCl, pH 7,5, 2,5 mM MgCl2, 0,025% Brij-35, 0,1 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 15 μM ATP e diverse concentrazioni di AT7519 per 30 minuti. Le reazioni del saggio vengono interrotte usando EDTA, trasferite su piastre rivestite di Neutravidina e il peptide fosforilato quantificato per mezzo di un anticorpo policlonale di coniglio anti-substrato fosfo-cdk1 e un anticorpo secondario anti-coniglio IgG marcato con europio DELFIA utilizzando la fluorescenza risolta nel tempo a λex=335nm, λem=620nm. Per i saggi CDK 4 e 6, le piastre vengono rivestite con GST-pRb769-921 e bloccate con Superblock. CDK4 o 6 viene incubato con 15 mM MgCl2, 50 mM HEPES, pH 7,4, 1 mM DTT, 1 mM EGTA, pH 8,0, 0,02% Triton X-100, 2,5% DMSO e diverse concentrazioni di AT7519; la reazione viene avviata con l'aggiunta di ATP. Dopo 30 minuti, le reazioni vengono interrotte con l'aggiunta di 0,5 M EDTA pH 8,0. Le piastre vengono quindi lavate e incubate per un'ora con l'anticorpo primario (anti-p-Rb Serina 780) diluito in Superblock, seguito dall'anticorpo secondario (anti-coniglio legato alla fosfatasi alcalina) per un'altra ora. Le piastre vengono sviluppate utilizzando il sistema Attophos e la fluorescenza letta su un lettore di piastre Spectramax Gemini a eccitazione 450 nm ed emissione 580 nm. In tutti i casi, i valori IC50 sono calcolati da curve replicate, utilizzando il software GraphPad Prism.
Saggio cellulare:[2]
  • Linee cellulari

    MM.1S, MM.1R, RPMI8226, U266, RPMI8266, RPMI-Dox40, OPM1 cells, primary MM cells and PBMNCs

  • Concentrazioni

    Dissolved in DMSO at a concentration of 10 mM, final concentrations 0.25-4 μM

  • Tempo di incubazione

    24 or 48 hours

  • Metodo

    Cells are incubated with different concentrations of AT7519 for 24 or 48 hours at 37°C. Cell viability is assessed by measuring 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrasodium bromide (MTT) dye absorbance. DNA synthesis is measured by tritiated thymidine uptake (3H-TdR). Apoptosis is assessed by using Annexin V/PI staining. The percentage of cells undergoing apoptosis is defined as the sum of early apoptosis (Annexin V-positive cells) and late apoptosis (Annexin V-positive and PI-positive cells
Studio sugli animali:[2]
  • Modelli animali

    Male SCID mice inoculated subcutaneously with MM.1S cells

  • Dosaggi

    15 mg/kg/day

  • Somministrazione

    Dosed i.p.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19174555/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20101221/

Convalida del prodotto da parte del cliente

(c) Effect of AT7519 treatment on RNA pol II occupancy at the PRCC gene. MM1.S cells were treated with either DMSO vehicle (blue) or 2 μM AT7519 (brown) for 6 h, followed by RNA pol II ChIP-seq analysis. Twenty-fold magnifications of the rpm/bp scale of these gene tracks are shown in the right panel to show the difference in reads for elongating RNA pol II. TR, RNA pol II traveling ratio.(d) Genome-wide binding average RNA pol II (ChIP-seq) on active promoters and gene bodies following treatment of MM1.S cells with DMSO vehicle (blue) or 2 μM of AT7519 (brown) for 6 h. Magnification of the rpm/bp scale at gene bodies is shown in the inset. The inset includes RNA polymerase II traveling ratio distributions (TR, mean) derived from MM1.S cells treated with DMSO (blue) or 2 μM AT7519 (red).(e) Chemical structures of the pan-CDK inhibitor AT7519 and its biotinylated counterpart bio-AT7519.(f) In vitro kinase assays with recombinant cyclin T-CDK9 complex in the presence of increasing concentrations of AT7519 or bio-AT7519. The derived IC50 values for each compound are shown.(g) Effect of AT7519 and bio-AT7519 on MM1.S cell proliferation. Cells were treated with varying concentrations of drug for 72 h as indicated. The derived EC50 values for each compound are shown.

Dati da [ , , Nat Biotechnol, 2014, 32(1): 92-96. ]

(C) Western blot analyses following treatment with the indicated doses of cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitors for apoptosis markers, poly(ADP-ribose) polymerase 1 (PARP-1), caspase 3, cleaved form of caspase 3 and β-actin.

Dati da [ , , Int J Oncol, 2018, 53(2):703-712 ]

Sellecks AT7519 HCl È stato citato da 12 Pubblicazioni

Interleukin-15 enhanced the survival of human γδT cells by regulating the expression of Mcl-1 in neuroblastoma [ Cell Death Discov, 2022, 8(1):139] PubMed: 35351861
O-GlcNAc transferase maintains metabolic homeostasis in response to CDK9 inhibition [ Glycobiology, 2022, cwac038] PubMed: 35708495
Cdk2 suppresses IL-23 expression and the onset of severe acute pancreatitis [ Immun Inflamm Dis, 2022, 10(6):e631] PubMed: 35634959
High-content image-based analysis and proteomic profiling identifies Tau phosphorylation inhibitors in a human iPSC-derived glutamatergic neuronal model of tauopathy [ Sci Rep, 2021, 11(1):17029] PubMed: 34426604
The cyclin-dependent kinase inhibitor AT7519 augments cisplatin's efficacy in ovarian cancer via multiple oncogenic signaling pathways [ Fundam Clin Pharmacol, 2021, 10.1111/fcp.12709] PubMed: 34212421
Development of a miRNA-controlled dual-sensing system and its application for targeting miR-21 signaling in tumorigenesis [ Exp Mol Med, 2020, 10.1038/s12276-020-00537-z] PubMed: 33311703
Inhibition of Cyclin-dependent Kinase (CDK) Decreased Survival of NB4 Leukemic Cells: Proposing a p53-Independent Sensitivity of Leukemic Cells to Multi-CDKs Inhibitor AT7519 [ Iran J Pharm Res, 2020, 19(3):144-155] PubMed: 33680018
Fibroblast growth factor receptor influences primary cilium length through an interaction with intestinal cell kinase [ Proc Natl Acad Sci U S A, 2019, 116(10):4316-4325] PubMed: 30782830
CDK Blockade Using AT7519 Suppresses Acute Myeloid Leukemia Cell Survival through the Inhibition of Autophagy and Intensifies the Anti-leukemic Effect of Arsenic Trioxide [ Iran J Pharm Res, 2019, 18(Suppl1):119-131] PubMed: 32802093
Frequent Genetic Aberrations in the CDK4 Pathway in Acral Melanoma Indicate the Potential for CDK4/6 Inhibitors in Targeted Therapy [Kong Y Clin Cancer Res, 2018, 23(22):6946-6957] PubMed: 28830923

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