(R)-(-)-Gossypol (AT-101) acetic acid

N. catalogoS2812 Lotto:S281201

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Dati tecnici

Formula

C30H30O8.C2H4O2
Peso molecolare 578.61 Numero CAS 866541-93-7
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 116 mg/mL (200.48 mM)
Ethanol 89 mg/mL (153.81 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione L'acido (R)-(-)-Gossypol (AT-101) acetico, l'enantiomero R-(-) dell'acido Gossypol acetico, si lega a Bcl-2, Bcl-xL e Mcl-1 con Ki di 0,32 μM, 0,48 μM e 0,18 μM in saggi acellulari; non inibisce il dominio BIR3 e BID. AT-101 innesca simultaneamente l'apoptosis e un tipo citoprotettivo di autophagy. Fase 2.
Target
Mcl-1
(Cell-free assay)		 Bcl-2
(Cell-free assay)		 Bcl-xL
(Cell-free assay)
0.18 μM(Ki) 0.32 μM(Ki) 0.48 μM(Ki)
In vitro L'AT-101 inibisce un pannello di diverse neoplasie linfoproliferative con IC50 comprese tra 1,2 μM e 7,4 μM. L'AT-101 (10 μM) interrompe il Δψm in modo concentrazione- e tempo-dipendente in linee di linfoma diffuso a grandi cellule B e di linfoma a cellule del mantello. L'AT-101 (1 μM o 2 μM) combinato con carfilzomib (6 nM o 10 nM) induce l'apoptosi nelle linee cellulari HBL-2 e Granta. L'AT-101 (20 μM per 24 ore) determina una mediana del 72% di apoptosi e una down-regulation di Mcl-1 nei linfociti CLL sia in coltura in sospensione che in co-coltura stromale. Le cellule stromali esprimono livelli non rilevabili di antiapoptotici ma alti livelli di proteine ERK e AKT attivate e presentano poca o nessuna apoptosi con AT-101. L'AT-101 induce l'apoptosi in modo tempo- e dose-dipendente, con valori di ED50 di 1,9 mM e 2,4 mM rispettivamente nelle cellule Jurkat T e U937. L'AT-101 (10 μM) combinato con radiazioni (32 Gy) induce più apoptosi rispetto alle radiazioni da sole e supera la somma degli effetti causati dai trattamenti con singolo agente. L'AT-101 attiva SAPK/JNK in modo dose- e tempo-dipendente. L'AT-101 (10 µM) induce l'apoptosi attraverso l'attivazione di caspasi-9, -3 e -7 nelle cellule VCaP. L'AT-101 (10 µM) diminuisce l'espressione di Bcl-2 e Mcl-1 nelle cellule VCaP. L'AT-101 (< 20 μM) è in grado di inibire la crescita delle cellule di mieloma multiplo nonostante gli effetti di crescita stimolatori forniti dalle cellule stromali nell'ambiente del midollo osseo. L'AT-101 (10 μM) induce l'apoptosi nelle cellule di mieloma multiplo tramite l'attivazione delle caspasi 3, delle caspasi 9 e della PARP. L'AT-101 (10 μM) promuove l'apoptosi nelle cellule di mieloma multiplo interrompendo il rapporto Bax/Bcl-2 e il potenziale della membrana mitocondriale.
In vivo L'AT-101 è ancora rilevabile nel plasma con concentrazioni medie di 0,49 μM per il gruppo da 35 mg/kg e 0,39 μM per il gruppo da 200 mg/kg in topi SCID beige portatori di xenotrapianto RL-DLBCL. La concentrazione plasmatica di picco di AT-101 è osservata dopo 30 minuti dall'amministrazione del farmaco in entrambi i livelli di dose, con il gruppo da 200 mg/kg che mostra una concentrazione plasmatica media quasi 4 volte superiore a quella del gruppo da 35 mg/kg (7,88 μM e 27,78 μM rispettivamente) in topi SCID beige. L'AT-101 (da 25 mg/kg a 100 mg/kg, per via orale) porta indefinitamente a un'insorgenza precoce di perdita di peso equivalente a più del 10% del peso pre-trattamento e alla morte in topi SCID beige. L'AT-101 (35 mg/kg, per via orale al giorno per 10 giorni) più ciclofosfamide intraperitoneale (Cy) e rituximab intraperitoneale (R) mostrano un controllo significativo del volume tumorale rispetto a qualsiasi altro gruppo di trattamento. L'AT-101 (15 mg/kg, p.o., 5 giorni/settimana) come singolo agente in topi intatti riduce significativamente lo sviluppo della crescita tumorale VCaP rispetto ai tumori non trattati alle settimane 2-6. L'AT-101 in combinazione con la castrazione chirurgica ritarda l'insorgenza della crescita tumorale VCaP andro-indipendente rispetto ai gruppi solo castrazione o solo AT-101 nei topi.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Saggio di legame basato sulla polarizzazione della fluorescenza

    Per esperimenti di legame competitivo, la proteina Bcl-2 (40 nM) e il peptide FAM-Bid (2,5 nM) vengono preincubati nel tampone di saggio (100 mM fosfato di potassio, pH 7,5; 100 μg/mL gamma globulina bovina; 0,02% sodio azide). 5 μL di una soluzione in DMSO di AT101 vengono aggiunti alla soluzione Bcl-2/FAM-Bid in piastre Dynex a 96 pozzetti, nere, a fondo tondo per produrre un volume finale di 125 μL. Per ogni esperimento, un controllo contenente Bcl-2 e peptide Flu-Bid (equivalente a 0% di inibizione), e un altro controllo contenente solo FAM-Bid, sono inclusi in ogni piastra di saggio. Dopo 4 ore di incubazione, i valori di polarizzazione in unità di millipolarizzazione (mP) sono stati misurati a una lunghezza d'onda di eccitazione di 485 nm e una lunghezza d'onda di emissione di 530 nm utilizzando il lettore di piastre Ultra. L'IC50, la concentrazione dell'inibitore alla quale il 50% del peptide legato viene spostato, è determinata dal grafico utilizzando l'analisi dei minimi quadrati non lineare e l'adattamento della curva eseguito utilizzando il software GraphPad Prizm 4. Il peptide Bid BH3 non marcato viene utilizzato come controllo positivo. PF per la proteina Bcl-xL, peptide Bak BH3 marcato con 6-carbossifluoresceina estere succinimidico (FAM-Bak) anziché FAM-Bim per massimizzare il segnale. Si determina che FAM-Bak ha una Kd di 6 nM per la proteina Bcl-xL. Il saggio di legame competitivo per Bcl-xL è lo stesso di quello per Bcl-2 con le seguenti eccezioni: 30 nM di proteina Bcl-xL e 2,5 nM di peptide FAM-Bak nel seguente tampone di saggio: 50 mM Tris-Bis, pH 7,4 e 0,01% di gamma globulina bovina. PF per la proteina Mcl-1, il peptide FAM-Bid e la proteina Mcl-1 umana vengono utilizzati. Si determina che il peptide FAM-Bid si lega alla proteina Mcl-1 umana con una Kd di 1,71 nM. I saggi di legame competitivo per Mcl-1 vengono eseguiti allo stesso modo di quelli per Bcl-2 con le seguenti eccezioni: 5 nM di Mcl-1 e 1 nM di peptide Flu-Bid nel seguente tampone di saggio: 25 mM Tris, pH 8,0; 150 mM NaCl e 0,05% di acido Pluronic.
Saggio cellulare:[2]
  • Linee cellulari

    RL, H9, SKI, HBL-2, Granta and JJN-3 cell lines

  • Concentrazioni

    ~10 μM

  • Tempo di incubazione

    72 hours

  • Metodo

    Cells are counted and resuspended at an approximate concentration of 3×105 cells/well in a 24-well plate. AT-101 is diluted in DMSO that is maintained at a final concentration of less than 0.5%. Concentrations of AT-101 from 1 nM to 10 μM are used in most experiments. Following incubation at 37 ℃ in a 5% CO2 humidified incubator, 100 μL from each well is transferred to a 96-well opaque-walled plate; cell-Titer-Glo Reagent is added in a 1:1 ratio. Contents are mixed for 2 minutes on an orbital shaker to induce cell lysis. The plates are allowed to incubate at room temperature for 10 minutes before recording luminescence with a Synergy HT Multi-Detection Microplate Reader. In the schedule dependency experiments, serial dilutions of each drug are prepared in ratios relative to their IC50. Cells are preincubated with AT-101 for up to 72 hours, while 4-HC is added for a 24-hour period, being added at time 0, 24 hours, and 48 hours from the start of incubation. Each experiment is performed in triplicate and repeated at least twice.
Studio sugli animali:[2]
  • Modelli animali

    SCID beige mice bearing RL-DLBCL xenograft

  • Dosaggi

    100 mg/kg

  • Somministrazione

    Oral gavage

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17034116/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18292288/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18836097/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19852810/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18084610/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18346839/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>(B and C) assessment of antimigration capacity in each group by transwell migration assay. Abbreviations: CDDP, cisplatin; DMSO, dimethyl sulfoxide.</p>

, , Drug Des Devel Ther, 2014, 8:2517-29.

The cellular autophagy induced by the concentration of AT101 (5 μM) and APE1 siRNA was examined by confocal microscopy with the application of Cyto-IDr autophagy detection kit.

Dati da [ , , Oncotarget, 2016, 7(23):34430-41 ]

Effect of AT-101 (AT) on MM cell lines survival. The survival of human (MM-B1, H-Meso-1, and MM-F1) and mouse (#40a) MM cell lines were assessed by the SRB assay after 24, 48, and 72 h of treatment with DMSO or AT-101. The percentage of surviving cells treated with the compound was calculated by normalizing the OD value to that of the control cultures (DMSO). The results are expressed as the means ± SD of three independent experiments performed in triplicate (xp ≤ 0.05, ∗p ≤ 0.01, #p ≤ 0.001 compared with the cultures treated with DMSO).

Dati da [ , , Front Pharmacol, 2018, 9:1269 ]

AT-101 enhances the antimigration ability of CDDP in A549 cells exposed to A549 cell-conditioned medium. Notes: (A) The cell migration assay was conducted using Transwell® plates. A549 cells were treated with the control vehicle, 5 μM CDDP, 5 μM AT-101, or 5 μM AT-101 plus 5 μM CDDP and the supernatants were collected as the tumor conditioned medium. A549 cells were suspended in serum-free Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium. A549 cells were seeded to the upper chambers, and the lower chambers were filled with RPMI 1640 medium containing 10% fetal bovine serum or tumor conditioned medium. After incubation for 18 hours at 37°C, cells were fixed, stained, and analyzed under inverted light microscopy (40× magnification). The number of migrated cells was counted using an inverted microscope. (B) Bar graph showing the migrating cell numbers of different treatment groups. Data are presented as the mean ± standard deviation of at least three independent experiments. **P<0.01 by one-way analysis of variance. Abbreviation: CDDP, cisplatin.

Dati da [ , , Drug Des Devel Ther, 2015, 9:2887-910 ]

Sellecks (R)-(-)-Gossypol (AT-101) acetic acid È stato citato da 20 Pubblicazioni

Follicle stimulating hormone controls granulosa cell glutamine synthesis to regulate ovulation [ Protein Cell, 2024, pwad065] PubMed: 38167949
Pharmacological Targeting of Bcl-2 Induces Caspase 3-Mediated Cleavage of HDAC6 and Regulates the Autophagy Process in Colorectal Cancer [ Int J Mol Sci, 2023, 24(7)6662] PubMed: 37047634
Exploiting ulnerabilities induced b recurrent mutations in chondrosarcoma and giant cell tumour of bone: therapeutic targeting of the altered epigenome and be [ Leiden University The Netherlands, 2023, ] PubMed: None
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Lactate Dehydrogenase B Is Required for Pancreatic Cancer Cell Immortalization Through Activation of Telomerase Activity [ Front Oncol, 2022, 12:821620] PubMed: 35669414
Gossypol Acetic Acid Attenuates Cardiac Ischemia/Reperfusion Injury in Rats via an Antiferroptotic Mechanism [ Biomolecules, 2021, 11(11)1667] PubMed: 34827665
AT101 [(-)-Gossypol] Selectively Inhibits MCL1 and Sensitizes Carcinoma to BH3 Mimetics by Inducing and Stabilizing NOXA [ Cancers (Basel), 2020, 12(8):E2298] PubMed: 32824203
Using CETSA assay and a mathematical model to reveal dual Bcl-2/Mcl-1 inhibition and on-target mechanism for ABT-199 and S1. [ Eur J Pharm Sci, 2020, 142:105105] PubMed: 31669390
Comparison of putative BH3 mimetics AT-101, HA14-1, sabutoclax and TW-37 with ABT-737 in platelets. [ Platelets, 2020, 10.1080/09537104.2020.1724276] PubMed: 32079453
Effect of Exosomal APE1 on Sensitivity of NSCLC A549 Cells to Cisplatin [ Cancer Research on Prevention and Treatment, 2020, (7): 492-497] PubMed: None

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