Xevinapant (AT406)

N. catalogoS2754 Lotto:S275404

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Dati tecnici

Formula

C32H43N5O4
Peso molecolare 561.71 Numero CAS 1071992-99-8
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (178.02 mM)
Ethanol 100 mg/mL (178.02 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Xevinapant (AT406, ARRY-334543, Debio1143, SM-406) è un potente mimetico di Smac e un antagonista di IAP (inibitore della proteina di Apoptosis tramite E3 Ligase ), che si lega a XIAP-BIR3, cIAP1-BIR3 e cIAP2-BIR3 con Ki di 66,4 nM, 1,9 nM e 5,1 nM, affinità 50-100 volte superiori rispetto al peptide Smac AVPI. Fase 1.
Target
cIAP1-BIR3
(cell-free assay)		 cIAP2-BIR3
(cell-free assay)		 XIAP-BIR3
(cell-free assay)
1.9 nM(Ki) 5.1 nM(Ki) 66.4 nM(Ki)
In vitro AT-406 è un mimetico di Smac e sembra imitare fedelmente il peptide AVPI sia nelle interazioni a ponte idrogeno che idrofobiche con XIAP, con ulteriori contatti idrofobici con W323 di XIAP. AT-406 è più sensibile a questi IAP rispetto al peptide Smac AVPI con affinità di legame 50-100 volte superiori. AT-406 (a 1 μM) ripristina completamente l'attività della caspasi-9, che è soppressa da 500 nM di XIAP BIR3 in un sistema privo di cellule. Nelle cellule MDA-MB-231, AT-406 induce una rapida degradazione cellulare di cIAP1 e lega anche la proteina XIAP cellulare. AT-406 inibisce efficacemente molte linee cellulari di cancro umano e mostra IC50 di 144 e 142 nM nelle cellule MDA-MB-231 e nelle cellule ovariche SK-OV-3, con bassa tossicità contro le cellule epiteliali mammarie umane simili a quelle normali MCF-12F e le cellule epiteliali prostatiche umane normali primarie. AT-406 induce Apoptosis nelle cellule MDA-MB-231 inducendo l'attivazione della caspasi-3 e la scissione di PARP.
In vivo AT-406 presenta buone proprietà farmacocinetiche (PK) e biodisponibilità orale in topi, ratti, primati non umani e cani. Nel xenotrapianto MDA-MB-231, AT-406 induce efficacemente la degradazione di cIAP1 e la processazione della procaspasi-8, la scissione di PARP nei tessuti tumorali a 100 mg/kg con buona tollerabilità anche a 200 mg/kg. AT-406 induce una significativa inibizione della crescita tumorale con un p di 0,0012 a 100 mg/kg.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggi basati sulla polarizzazione di fluorescenza per le proteine XIAP, cIAP1 e cIAP2 BIR3

    FL-AT-406 (l'AT-406 marcato fluorescentemente) è impiegato per sviluppare una serie di nuovi saggi FP per la determinazione delle affinità di legame dei mimetici di Smac alle proteine XIAP, cIAP-1 e cIAP-2 BIR3. Il valore di Kd di FL-AT-406 per ogni proteina IAP viene determinato mediante esperimenti di titolazione utilizzando una concentrazione fissa di FL-AT-406 e diverse concentrazioni della proteina fino alla completa saturazione. I valori di polarizzazione di fluorescenza vengono misurati utilizzando un lettore di piastre Infinite M-1000 in piastre Microfluor 2 a 96 pozzetti, nere, con fondo rotondo. A ciascun pozzetto vengono aggiunti FL-AT-406 (2, 1 e 1 nM per esperimenti con XIAP BIR3, cIAP-1 BIR3 e cIAP-2 BIR3, rispettivamente) e diverse concentrazioni della proteina a un volume finale di 125 μL nel tampone di saggio (100 mM fosfato di potassio, pH 7,5, 100 μg/mL γ-globulina bovina, 0,02% azide di sodio, con 4% DMSO). Le piastre vengono mescolate e incubate a temperatura ambiente per 2-3 ore con agitazione delicata. I valori di polarizzazione in unità di millipolarizzazione (mP) vengono misurati a una lunghezza d'onda di eccitazione di 485 nm e una lunghezza d'onda di emissione di 530 nm. Le costanti di dissociazione di equilibrio (Kd) vengono quindi calcolate adattando gli aumenti di FP sigmoidi dose-dipendenti in funzione delle concentrazioni proteiche utilizzando il software Graphpad Prism 5.0. In esperimenti di legame competitivo per XIAP3 BIR3, AT-406 viene incubato con 20 nM di proteina XIAP BIR3 e 2 nM di FL-AT-406 nel tampone di saggio (100 mM fosfato di potassio, pH 7,5; 100 μg/mL γ-globulina bovina; 0,02% azide di sodio). Negli esperimenti di legame competitivo per la proteina cIAP1 BIR3, vengono utilizzati 3 nM di proteina e 1 nM di FL-AT-406. Negli esperimenti di legame competitivo per cIAP2 BIR3, vengono utilizzati 5 nM di proteina e 1 nM di FL-AT-406. Per ogni esperimento di legame competitivo, i valori di polarizzazione vengono misurati dopo 2-3 ore di incubazione utilizzando un lettore di piastre Infinite M-1000. Il valore IC50, la concentrazione dell'inibitore alla quale il 50% del tracciante legato viene spostato, viene determinato dal grafico utilizzando l'analisi dei minimi quadrati non lineare. L'adattamento della curva viene eseguito utilizzando il software PRISM. Viene calcolato un valore Ki per AT-406.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    MDA-MB-231 breast cancer and SK-OV-3 ovarian cancer cell lines

  • Concentrazioni

    ~ 1 μM

  • Tempo di incubazione

    4 days

  • Metodo

    Cells are seeded in 96-well flat bottom cell culture plates at a density of (3-4) × 103 cells/well with AT-406 and incubated for 4 days. The rate of cell growth inhibition after treatment with different concentrations of AT-406 is determined by assaying with (2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium monosodium salt (WST-8). WST-8 is added to each well to a final concentration of 10%, and then the plates are incubated at 37 °C for 2−3 hours. The absorbance of the samples is measured at 450 nm using a TECAN ULTRA reader. Concentration of AT-406 that inhibited cell growth by 50% (IC50) is calculated by comparing absorbance in the untreated cells and the cells treated with AT-406.
Studio sugli animali:

[1]
  • Modelli animali

    MDA-MB-231 xenograft tumors in severe combined immune deficiency (SCID) mice

  • Dosaggi

    10 mg/kg (i.v.), 10 mg/kg (p.o.), 30 mg/kg (p.o.) and 100 mg/kg (p.o.)

  • Somministrazione

    Administered via intravenously (i.v.) or oral gavage (p.o.)

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21443232/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>G, cells treated with the SM406 (1 μmol/L) for 48 hours were subjected to Western blotting.</p>

, , Cancer Res, 2015, 75(8):1736-48.

<p>(C) The U2OS cells were treated with TRAIL for 5 h, and with or without pre-treatment of A(AT406) for 1 h, and transient transfection with c-FLIP-siRNA for 24 h as indicated in the graph.</p>

, , Int J Oncol, 2016, 49(1):153-63.

<p>AT406 is cytotoxic to human pancreatic cancer cells. Panc-1 cells (A-C), Mia-PaCa-2 cells (D), primary human pancreatic cancer cells (“Primary Pan Can”, D) or epithelial HPDE6c7 cells (D) were either left untreated (“Ctrl”, same for all figures) or stimulated with applied concentrations of AT406 (10-1000 nM) for indicated periods of time, cell survival was tested by CellTiter-Glo luminescent assay (A and D) and the clonogenic assay (B); Cell proliferation was tested by BrdU incorporation assay (C). All values were expressed as mean ± SD. For each assay, n = 5. Experiments in this figure were repeated three times, and similar results were obtained. *p < 0.05 vs. group of “Ctrl”.</p>

, , Biochem Biophys Res Commun, 2016, 478(1):293-9.

HepG2 cells were treated with AT406 (10 μM) or plus OSI-027 (“OSI”, 100 nM), cells were further cultured for indicated periods of time, expression of listed proteins was tested by Western blotting assay (A). HepG2 cells transfected with scramble non-sense control siRNA (“NS-siRNA”) or Mcl-1 siRNA (“-1/-2”, 200 nM each, 24 hours) were stimulated with AT406 (10 μM) for indicated periods of time, Mcl-1 expression (B, upper panel); Cell viability (B, lower panel) and cell apoptosis (C) were tested. *indicated statistically significant differences as compared to “Ctrl” group. ##indicated statistically significant differences as compared to “NS-siRNA” group.

Dati da [ , , Oncotarget, 2017, 8(6):9466-9475 ]

Sellecks Xevinapant (AT406) È stato citato da 39 Pubblicazioni

Caspase 9-induced apoptosis enables efficient fetal cell ablation and disease modeling [ Nat Commun, 2025, 16(1):2572] PubMed: 40089478
The cancer-associated SF3B1K700E spliceosome mutation confers enhanced sensitivity to BV-6-induced cytotoxicity [ Cell Death Dis, 2025, 16(1):476] PubMed: 40595498
Potentiating CAR-T bystander killing by enhanced Fas/FasL signaling mitigates antigen escape in heterogeneous tumors [ bioRxiv, 2025, 2025.09.22.677496] PubMed: 41040218
Complex IIa formation and ABC transporters determine sensitivity of OSCC to Smac mimetics [ Cell Death Dis, 2024, 15(11):855] PubMed: 39578442
Combination Treatment of Resistant Acute Promyelocytic Leukemia Cells with Arsenic Trioxide and Anti-Apoptotic Gene Inhibitors [ Pharmaceuticals (Basel), 2024, 17(11)1529] PubMed: 39598439
The Effect of Xevinapant Combined with Ionizing Radiation on HNSCC and Normal Tissue Cells and the Impact of Xevinapant on Its Targeted Proteins cIAP1 and XIAP [ Cells, 2023, 12(12)1653] PubMed: 37371123
Mycoplasma hyorhinis infection promotes TNF-α signaling and SMAC mimetic-mediated apoptosis in human prostate cancer [ Heliyon, 2023, 9(10):e20655] PubMed: 37867861
CD137 (4-1BB) requires physically associated cIAPs for signal transduction and antitumor effects [ Sci Adv, 2023, 9(33):eadf6692] PubMed: 37595047
CD4+ T cell-mimicking nanoparticles encapsulating DIABLO/SMAC mimetics broadly neutralize HIV-1 and selectively kill HIV-1-infected cells [ Theranostics, 2021, 11(18):9009-9021] PubMed: 34522224
Targeting c-IAP1, c-IAP2, and Bcl-2 Eliminates Senescent Glioblastoma Cells Following Temozolomide Treatment [ Cancers (Basel), 2021, 13(14)3585] PubMed: 34298797

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