In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
Apremilast (CC-10004) è un potente inibitore orale attivo di PDE4 e TNF-α con IC50 di 74 nM e 77 nM, rispettivamente.
Target
PDE4
TNF-α
74 nM
77 nM
In vitro
Apremilast è più potente nell'inibizione della PDE4 rispetto agli enzimi idrolizzanti cAMP o cGMP di altre famiglie di PDE. Questo composto mostra un ampio modello di attività antinfiammatoria in una varietà di tipi cellulari, inibisce la produzione di TNF-α, IL-12 e IL-23, nonché le risposte delle cellule NK e dei cheratinociti. È stato riscontrato che inibisce la produzione di IL-8 indotta da zymosan da PMN con IC50 di 94 nM. Questa sostanza chimica inibisce l'espressione di PMN CD18 e CD11b indotta da fMLF con IC50 di 390 nM e 74 nM, rispettivamente, e inibisce l'adesione di PMN a HUVEC indotta da fMLF con IC50 di 150 nM. Inibisce la produzione di TNF-α da parte dei cheratinociti, senza alcun effetto sulla vitalità delle cellule cheratinocitiche misurata dai livelli di ATP intracellulare. .
In vivo
Apremilast è stabile in presenza di microsomi umani (t1/2 > 60 min). È legato al 90% alle proteine nel plasma umano. La somministrazione orale e endovenosa di questo composto in ratti femmine ha mostrato che ha una buona farmacocinetica con bassa clearance, un moderato volume di distribuzione e una biodisponibilità orale del 64%. In un modello di inibizione del TNF-α indotta da LPS nei ratti, la capacità inibitoria del TNF-α di questo composto è stata esaminata in vivo, e l'ED50 è stata determinata essere 0,03 mg/kg. In un altro modello di neutrofilia indotta da LPS nei ratti, questo composto ha mostrato un intervallo di ED50 da 0,3 mg/kg a 0,9 mg/kg.
Le cellule (1×109) vengono lavate in PBS e lisate in tampone di omogeneizzazione freddo (20 mM Tris-HCl, pH 7,1, 3 mM 2-mercaptoetanolo, 1 mM MgCl2, 0,1 mM EGTA, 1 μM PMSF, 1 μg/mL leupeptina). Dopo l'omogeneizzazione in un omogeneizzatore Dounce, il surnatante viene raccolto per centrifugazione e caricato su una colonna Sephacryl S-200 equilibrata in tampone di omogeneizzazione. La PDE viene eluita in tampone di omogeneizzazione e le frazioni sensibili al rolipram vengono raggruppate e conservate in aliquote. L'attività enzimatica viene saggiata in 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 5 mM MgCl2 e 1 μM cAMP (di cui l'1% è 3H cAMP) in presenza di diverse concentrazioni di inibitori. La quantità di estratto utilizzata è predeterminata per garantire che le reazioni rientrino nell'intervallo lineare e consumino meno del 15% del substrato totale. Le reazioni vengono eseguite a 30 °C per 30 min e terminate con ebollizione per 2 min. I campioni vengono quindi raffreddati e trattati con veleno di serpente (1 mg/mL) a 30 °C per 15 min. Il substrato non utilizzato viene rimosso mediante incubazione con 200 μL di resina AG1-X8 per 15 min. I campioni vengono quindi centrifugati a 3000 rpm per 5 min e 50 μL della fase acquosa vengono prelevati per il conteggio. Ogni punto dati viene eseguito in duplicato con l'attività espressa come percentuale del controllo. L'IC50 viene determinata dalle curve dose-risposta derivate da tre esperimenti indipendenti.
For proliferation studies, human neonatal foreskin epidermal keratinocytes (HEKn cells) are plated at 3000 cells per well in 96-well flat bottom tissue culture plates for 2 days. HEKn cells are treated with apremilast or 0.1% DMSO as the vehicle control for 1 h before ultraviolet B (UVB) irradiation with 50 mJ/cm2 in a UV Stratalinker 2400, calibrated with 312 nm UVB bulbs. Media and this compound are replaced, and cells are incubated for 18 h. Lysates are transferred to plates and shaken for 2 min before chemiluminescence is read on a TopCount NXT Luminescence Counter.
Sellecks Apremilast È stato citato da 9 Pubblicazioni
Intestinal dysbiosis exacerbates the pathogenesis of psoriasis-like phenotype through changes in fatty acid metabolism
[ Signal Transduct Target Ther, 2023, 8(1):40]
Targeting PDE4 as a promising therapeutic strategy in chronic ulcerative colitis through modulating mucosal homeostasis
[ Acta Pharm Sin B, 2022, 12(1):228-245]
Phosphodiesterase-4 Inhibition Reduces Cutaneous Inflammation and IL-1β Expression in a Psoriasiform Mouse Model but Does Not Inhibit Inflammasome Activation
[ Int J Mol Sci, 2021, 22(23)12878]
Application of a newly-developed cynomolgus macaque BiTE-mediated cytotoxic T-lymphocyte activity assay to various immunomodulatory agents in vitro
[ J Immunotoxicol, 2021, 18(1):154-162]
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