Ansamitocin p-3 (Maytansinol isobutyrate, NSC292222)

Ansamitocin p-3 (Maytansinol isobutirrato, NSC292222) a 5 μM inibisce completamente la polimerizzazione della tubulina isolata da cervelli bovini, ma a differenza del VCR, questo composto ad alta concentrazione di 80 μM non porta all'aggregazione della tubulina. A 16 μM depolimerizza anche potentemente la tubulina polimerizzata (IC50 = 3,8 μM). L'aggiunta di Ansamitocin p-3 alle cellule in coltura blocca l'alterazione morfologica delle cellule AC da fibroepitelioidi a un tipo di cellula gliale causata dall'esposizione a una certa concentrazione di dibutyryl adenosina 3':5'-monofosfato ciclico. Inoltre, a 16 nM provoca una rapida dispersione della rete ben definita di microtubuli citoplasmatici delle cellule A31. Il trattamento a breve termine con questo composto inibisce anche la sintesi del DNA nelle cellule A31 o KB. Questi risultati confermano che agisce interferendo con il sistema di assemblaggio dei microtubuli, con conseguente inibizione della formazione delle fibre del fuso mitotico e, in ultima analisi, citocidità. [1] Questo composto mostra una potente citotossicità contro le cellule A-549, HT-29 e MCF-7 in modo dose-dipendente con ED50 di 4 ×10^-7, 4 × 10^-7 e 2 × 10^-6 μg/mL, rispettivamente. [2] Mostra anche citotossicità contro le cellule HCT-116 con una EC50 molto bassa di 0,081 nM. [3] Ansamitocin p-3 migliora l'effetto delle radiazioni sia nelle cellule di Drosophila che nelle cellule tumorali umane in modo dipendente da p53. [4]

Il trattamento con Ansamitocin p-3 (Maytansinol isobutirrato, NSC292222) (>1 μg) sopprime significativamente la crescita della leucemia SN36 e induce un maggiore arresto in metafase delle cellule di leucemia P388. A 25 μg/kg/die, prolunga significativamente il tempo di sopravvivenza dei topi portatori di melanoma B16 i.p. del 130%. Questo composto prolunga anche significativamente il tempo di sopravvivenza dei topi portatori di carcinoma ascitico di Ehrlich, sarcoma 180 e mastocitoma P815, mentre prolunga leggermente il tempo di sopravvivenza dei topi portatori di mieloma ascitico MOPC-104E, leucemia L1210 e leucemia C1498. [1]

• Saggio di inibizione della polimerizzazione

  Dopo l'aggiunta di 100 μL di varie concentrazioni di soluzione di Ansamitocin p-3 (Maytansinol isobutirrato, NSC292222) (tampone MES senza GTP) o tampone Tris 1 M, pH 8,4 (per il bianco), a 400 μL di soluzione di tubulina bovina (1 mg/mL in tampone MES freddo), mantenuta a 0 °C per 10-15 minuti, la miscela viene riscaldata in un bagno d'acqua a 37 °C per 30-60 minuti. La polimerizzazione della tubulina è seguita da un aumento della torbidità della miscela durante il riscaldamento. La misurazione della torbidità viene eseguita a 460 nm con uno spettrofotometro Hitachi tipo 101.

• Linee cellulari

  A31 and KB

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Tempo di incubazione

  ~24 hours

• Metodo

  Cells are synchronized and then exposed to various concentrations of Ansamitocin p-3 (Maytansinol isobutyrate, NSC292222) for ~24 hours. After pulse-labeling at 37 °C for 1 hour with [³H]thymidine (5 Ci/mM, 1 µCi/mL) in 1 mL of the medium, the cells on coverslips are fixed with methanol:acetic acid (3:1). The acid-soluble fraction is washed out from the cells, and the radio activity of each coverslip is determined by a liquid scintillation counter.

• Modelli animali

  Female DBA/2 mice bearing P388, L1210, or P815 cells, C57BL/6 mice bearing B16, or C1498 cells, ICR mice bearing sarcoma 180 and EAC, and BALB/c mice bearing MOPC-104E cells

• Dosaggi

  ~200 μg/kg

• Somministrazione

  Administered i.p. or i.v. daily