AMG-900

AMG 900 è una nuova classe di inibitori di piccole molecole di ftalazinammina, competitivi per l'ATP, delle Aurora kinases. Nelle cellule HeLa, AMG 900 inibisce l'autofosforilazione di Aurora-A e -B, nonché la fosforilazione dell'istone H3 su Ser, un substrato prossimale di Aurora-B. La risposta cellulare predominante delle cellule tumorali al trattamento con AMG 900 è l'aborto della divisione cellulare senza un arresto mitotico prolungato, che alla fine porta alla morte cellulare. AMG 900 inibisce la proliferazione di 26 linee cellulari tumorali, incluse linee cellulari resistenti ad altri inibitori della chinasi Aurora (AZD1152, MK-0457 e PHA-739358), a basse concentrazioni nanomolari (circa 2-3 nM). Inoltre, AMG 900 è attivo in una linea cellulare variante HCT116 resistente ad AZD1152 che presenta una mutazione di Aurora-B (W221L). [1]

La somministrazione orale di AMG 900 blocca la fosforilazione dell'istone H3 in modo dose-dipendente e inibisce significativamente la crescita degli xenotrapianti tumorali HCT116. AMG 900 è ampiamente attivo in numerosi modelli di xenotrapianto, inclusi 3 modelli di xenotrapianto multiresistenti, che rappresentano 5 tipi di tumore. [1] AMG 900 mostra una clearance da bassa a moderata e un piccolo volume di distribuzione. La sua emivita di eliminazione terminale variava da 0,6 a 2,4 ore. AMG 900 è ben assorbito negli animali a digiuno con una biodisponibilità orale dal 31% al 107%. L'assunzione di cibo ha un effetto sulla velocità (ratti) o sull'estensione (cani) dell'assorbimento orale di AMG 900. La clearance e il volume di distribuzione allo stato stazionario negli esseri umani sono previsti essere rispettivamente di 27,3 mL/h/kg e 93,9 mL/kg. AMG 900 presenta proprietà farmacocinetiche accettabili nelle specie precliniche e si prevede che avrà una bassa clearance negli esseri umani. [2]

• Saggi enzimatici chinasici

  Le proteine ricombinanti Aurora-A (TPX2) e Aurora-B, marcate con GST o His, sono espresse utilizzando un sistema di baculovirus e purificate mediante cromatografia di affinità. L'attività di AMG 900 viene valutata utilizzando un saggio standardizzato di fluorescenza risolta nel tempo omogenea (HTRF). I saggi enzimatici per altre 24 chinasi (Aurora-C, p38α, TYK2, JNK2, JAK3, c-Met, VEGFR2, p38β, TIE-2, ABL (T315I), ERK1, BTK, JNK3, CDK5, PKAα, JNK1, p70S6K, PKBα, MSK1, LCK, SRC, IGFR, JAK2 e c-KIT) sono eseguiti internamente in modo simile. Le concentrazioni di enzima, substrato peptidico e ATP nella reazione sono ottimizzate a seconda dell'attività specifica della chinasi e dei valori di K_m misurati per i loro substrati corrispondenti. AMG 900 è valutato in un saggio di legame competitivo del chinoma (n = 353 chinasi uniche) da Ambit Biosciences. AMG 900 viene inizialmente screenato a una singola concentrazione di 1000 nM, e le costanti di legame quantitative (Kd) sono determinate per ogni hit positivo (< 20 percento del controllo).

• Linee cellulari

  Different tumor cell lines including NCI-H460, MDA-MB231, MES-SA, NCI-H460 PTX, MDA-MB-231 PTX, MES-SA Dx5, and HCT-15.

• Concentrazioni

  0.5, 5.0, 50 nM

• Tempo di incubazione

  48 hours

• Metodo

  Tumor cells are treated with AMG 900 for 48 hours, washed twice with complete media, and cells are replated at a density of 5000 cells per well in drug-free complete media. Cells are grown until the DMSO control wells are confluent. Cells are stained with crystal violet dye, washed with distilled water, and imaged using a digital scanner.

• Modelli animali

  Nude mice bearing established HCT116 tumors

• Dosaggi

  3.75, 7.5, or 15 mg/kg

• Somministrazione

  Orally administered